[发明专利]一种用于筛选具有抗慢性缺氧病变活性的药物的细胞模型及其用途和使用方法在审
申请号: | 201610064454.4 | 申请日: | 2016-01-29 |
公开(公告)号: | CN105695486A | 公开(公告)日: | 2016-06-22 |
发明(设计)人: | 谭锐;顾健 | 申请(专利权)人: | 西南交通大学 |
主分类号: | C12N15/53 | 分类号: | C12N15/53;C12N15/65;C12N15/85;C12N5/10;C12Q1/68 |
代理公司: | 成都华风专利事务所(普通合伙) 51223 | 代理人: | 杜朗宇 |
地址: | 610031 四*** | 国省代码: | 四川;51 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 用于 筛选 具有 慢性 缺氧 病变 活性 药物 细胞 模型 及其 用途 使用方法 | ||
1.一种基因构建物,其特征在于:所述基因构建物从5’端到3’端依次含有:HIF-1ɑ启动子基因-583bp~+23bp序列和报告基因序列。
2.如权利要求1所述的基因构建物,其特征在于:所述报告基因选自:荧光蛋白基因和/或荧光素酶基因;进一步地,所述荧光蛋白基因为绿色荧光蛋白基因或红色荧光蛋白基因,所述荧光素酶基因为萤火虫荧光素酶基因。
3.一种重组载体,其特征在于:所述的重组载体含有权利要求1或2任一项所述的基因构建物。
4.一种稳定的细胞,其特征在于:所述的细胞含有权利要求3所述的重组载体或其基因组中整合有权利要求1或2任一项所述的基因构建物。
5.如权利要求4所述的稳定的细胞,其特征在于:所述的细胞选自HEK293细胞、Hela细胞、CHO细胞或干细胞中的任一种。
6.构建权利要求3所述重组载体的方法,其特征在于:它包括如下步骤:
(1)合成HIF-1ɑ启动子基因-583bp~+23bp序列;
(2)将步骤(1)合成的序列与带有报告基因的报告载体分别进行酶切,连接报告载体与启动子片段,转化大肠杆菌,抗性筛选,挑选阳性转化子,提取质粒,即得重组载体;
进一步地,步骤(2)中,所述报告载体为带有报告基因的pSC基础质粒。
7.构建权利要求4所述的稳定的细胞的方法,其特征在于:将权利要求3所述的重组载体转染HEK293细胞、Hela细胞、CHO细胞或干细胞中的任一种。
8.权利要求4所述的稳定的细胞的用途,其特征在于:所述的细胞用于筛选可提高HIF-1ɑ表达水平或具有抗慢性缺氧病变活性的药物。
9.一种筛选可提高HIF-1ɑ表达水平或具有抗慢性缺氧病变活性的药物的方法,其特征在于,所述方法包括如下步骤:
(1)将候选药物给予权利要求4或5所述的稳定的细胞;
(2)检测所述细胞中报告基因的表达情况;
(3)判断结果,若所述候选药物能提高报告基因的表达,则表明该候选药物可提高HIF-1ɑ表达水平或具有抗慢性缺氧病变活性;
进一步地,步骤(1)包括将候选药物加入权利要求4或5所述的稳定的细胞培养体系中共培养;
步骤(2)包括检测实验组的报告基因的表达,并与空白对照组比较,所述空白对照组是不添加所述候选药物的与实验组相同条件培养的权利要求4或5所述的细胞;
若实验组中报告基因的表达水平高于对照组,表明候选药物可提高HIF-1ɑ表达水平或抗慢性缺氧病变活性。
10.根据权利要求9所述的方法,其特征在于:实验组的报告基因的表达水平/对照组的报告基因的表达水平≥150%,表明候选药物可提高HIF-1ɑ表达水平或具有抗慢性缺氧病变活性。
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