[发明专利]用于培育转基因玉米的培养基及培养方法

说明书

本发明提供用于培育转基因玉米的培养基，包括共培养培养基、愈伤诱导培养基、筛选培养基、分化培养基和生根培养基，其中共培养培养基和愈伤诱导培养基中分别添加有终浓度为0.5‑1.0mg/L的NAA，0.005‑0.05mg/L的TDZ和/或0‑0.1mg/L的KT。本发明还提供转基因玉米的培养方法，以玉米幼胚为外植体，通过农杆菌转化的方法获得转基因玉米植株，为玉米遗传育种提供新的种质资源。本方法具有周期短、阳性率高、操作简单的特点，为实现商业化大规模生产转基因玉米提供了新的方法。

技术领域

本发明涉及植物转基因技术领域和作物遗传育种领域，具体地说，涉及用于培育转基因玉米的培养基及培养方法。

背景技术

玉米是我国重要的粮食作物和饲料作物，在我国粮食生产和国民经济中占有重要地位。然而自2010年以来，我国已从玉米净出口国转变为净进口国。2012年我国进口玉米521万吨，价值17亿美元。因此，通过育种技术的应用提高玉米产量，掌握玉米产业主动权是保持国内玉米供需平衡的关键，也将对我国粮食安全和应对可能出现的粮食危机产生深远影响。

随着生物技术的不断发展，越来越多优于传统育种技术的新型育种技术不断涌现。传统育种技术周期长，需要不断地回交才能获得纯合后代。生物技术育种很大程度上缩短了育种周期，因而得到了较快发展，转基因育种便是其中的一种。在转化方法方面，除了基因枪法，还包括电击法、超声波法、微注射法、PEG法和农杆菌介导法。农杆菌介导法操作简单，转化率较高，费用低，且导入的外源基因多为单拷贝，是目前应用最为广泛的转化方法。

在玉米转基因技术上，直到80年代后期才在遗传转化方面取得突破。1975年第一例玉米自交系(A188)转化再生植株见于报道。1988年，Klein等人以玉米的胚状体和非胚状体细胞为外植体，用基因枪法转移cat基因，观察到瞬时表达。农杆菌介导法直到1996年才成功用于转化玉米自交系A188。除了转化方法的限制，基因型也是限制玉米遗传转化发展的重要因素。因此，开发适合商业化生产的玉米品种的高效稳定的转基因方法，对于掌握转基因玉米产业主动权具有至关重要的作用。

发明内容

本发明的目的是提供用于培育转基因玉米的培养基及培养方法。

为了实现本发明目的，本发明提供的用于培育转基因玉米的培养基组合，包括共培养培养基、愈伤诱导培养基、筛选培养基、分化培养基和生根培养基；

其中，所述共培养培养基和愈伤诱导培养基中添加NAA(萘乙酸)、TDZ(噻二唑苯基脲)和/或KT(6-糠基氨基嘌呤)，它们的终浓度分别为0.5-1.0mg/L、0.005-0.05mg/L、0-0.1mg/L；优选地，TDZ和NAA终浓度分别为0.005mg/L和0.5mg/L，KT的终浓度为0.1mg/L。

所述筛选培养基中添加有草丁膦，其终浓度为5-200mg/L，优选10-40mg/L，更优选20mg/L。

所述共培养培养基的组成如下：MS盐0.8-1.2g/L+N6盐0.8-1.5g/L+蔗糖15-30g/L+葡萄糖5-15g/L+脯氨酸0.1-0.3g/L+盐酸硫胺素0.1-1mg/L+AgNO₃(硝酸银)10-20μM+L-半胱氨酸100-500mg/L+2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)1-1.5mg/L+NAA0.5-1.0mg/L+TDZ 0.005-0.05mg/L和/或KT 0-0.1mg/L+乙酰丁香酮100-500μM+MES(2-吗啉乙磺酸)0.5-1g/L+1000×MS维生素1mL/L+植物凝胶6-10g/L。