[发明专利]水稻胰蛋白酶抑制剂OsBBTI4基因的新应用

权利要求书

1.氨基酸序列如SEQIDNO.2的水稻蛋白酶抑制剂OsBBTI4和/或OsBBTI4基因在水稻中降低重金属镉积累的应用，所述OsBBTI4基因的cDNA为如SEQIDNO.1所示的核苷酸序列，或为与SEQIDNO.1互补配对的核苷酸序列，或为编码序列氨基酸序列如SEQIDNO.2的核苷酸序列。

2.插入有核苷酸序列如SEQIDNO.1所示的OsBBTI4基因的水稻超表达载体。

3.根据权利要求2所述的水稻超表达载体，其特征是，所述超表达载体为pCU1301，基因插入位点为BamHI。

4.权利要求2所述的水稻超表达载体的制备方法，其特征是，包括以下步骤：

(1)以水稻基因组DNA为模板，以SEQIDNO.3和SEQIDNO.4为引物，进行扩增，回收扩增产物；

(2)对水稻转基因超表达载体pCU1301进行BamHI酶切处理，回收线性化pCU1301载体；

(3)将扩增产物与线性化的pCU1301载体连接，鉴定阳性克隆并提取质粒OsBBTI4-pCU1301，即得。

5.权利要求2所述水稻超表达载体在水稻中降低重金属镉积累的应用。

6.插入有核苷酸序列如SEQIDNO.1所示的OsBBTI4基因的RNAi表达载体。

7.根据权利要求6所述的RNAi表达载体，其特征是，所述表达载体为pTCK303。

8.权利要求6所述的RNAi表达载体的制备方法，其特征是，包括有以下步骤：

(1)以水稻基因组DNA为模板，以SEQIDNO.5和SEQIDNO.6为引物，进行扩增，回收扩增产物；

(2)将扩增产物连接于pGEMT-Vector上形成pGEMT-BBTI4RI；

(3)用SacI和SpeI双酶切pGEMT-BBTI4RI，回收得到片段F1，同时用SacI和SpeI双酶切载体pTCK303，将回收后的F1片段与经SacI和SpeI双酶切处理后的pTCK303载体连接，形成pTCK303-BBTI4RI-F1；

(4)用BamHI和KpnI双酶切pGEMT-BBTI4RI并回收得到片段F2，然后将片段F2与BamHI和KpnI双酶切处理后pTCK303-BBTI4RI-F1载体连接，即得。

9.权利要求6所述的RNAi表达载体在水稻中降低重金属镉积累的应用。

10.一种降低水稻中重金属镉积累的生物制剂，其特征在于，其活性成份包括有权利要求2所述的水稻超表达载体和/或权利要求6所述的RNAi表达载体。