[发明专利]一种SAA免疫层析试纸条及其制备方法和检测方法

说明书

本发明涉及免疫分析检测领域。具体而言，本发明涉及一种检测SAA的免疫层析 检测试纸的制备方法及应用。

背景技术

Rosenthal等人在1976年从血清中分离出一种分子量大约12000的蛋白质，与先前 发现的分子量为8500的组织淀粉样蛋白A有相似的免疫原性，称为血清淀粉样物质A（serum amyloidA，SAA）。SAA时组织淀粉样蛋白A的前体物质，属于急性时相蛋白，在组织损伤和炎 症反应时升高，影响细胞的黏附、迁移、增殖和聚集。目前急性时相反应蛋白（acutephase protein，APP）可分为五类，即参与抑制蛋白酶作用的APP；参与血凝和纤溶的APP；属于补体 成分的APP；参与运转的APP；其他多种APP包括C-反应蛋白（C-responseprotein，CRP）、纤 维连接蛋白、血清淀粉样物质A等，CRP是研究较多且临床应用较广泛的急性时相反应蛋白， 近年来，随着对SAA的基因调控、蛋白结构及生物学功能研究的深入，发现SAA对包括急性心 肌梗死、移植后急性排斥反应和病毒感染等疾病的早期诊断作用要优于CRP。

近年来认为炎症过程参与动脉粥样硬化的形成，研究发现急性心肌梗死（AMI）后3 天SAA显著升高，可达到正常值的5000倍，而同时CRP升高为正常值的100倍，认为SAA作为 AMI的辅助诊断指标优于CRP。Johnson等人针对705名怀疑有心肌缺血的女性患者进行了多 中心研究，发现SAA水平与冠脉造影证实的冠状动脉疾病存在相关性，认为SAA可以作为预 测心血管事件的一个独立指标。

移植排斥反应时器官移植失败的主要原因，如果能及时检测出早期的移植排斥反 应，立即进行抗排异治疗，有助于逆转移植物的排斥，肾移植3个月内亚临床排斥反应的发 生率大概是30%左右，研究认为是否用皮质甾类药物治疗亚临床排斥反应会影响移植术后 的结果。早期治疗亚临床排斥反应，有助于减低急性排斥反应的发生率，维持较低的血清肌 酐浓度，改善移植后器官功能。Hartmann等研究发现在器官移植排异反应早期SAA显著升 高，而CRP在急性和超急性排异反应前后变化不明显，而且SAA会在最短的时间内对成功的 排异治疗做出反应，认为在诊断移植排异和评估抗排异疗效时，SAA优于CRP。

Hogarth等人对平均年龄为83岁是66名女性和平均年龄为84岁的男性进行了前瞻 性调查研究，比较了SAA和CRP在诊断和监测感染性疾病预后中的作用。结果发现CRP和SAA 均可预示较差的预后，比如复发和死亡，而监测感染急性期反应，SAA是比CRP更敏感的指 标，有7%的CRP正常的感染性疾病患者可通过SAA检测出。CRP和SAA是两种不同的蛋白质，两 者联合检测有助于指导急性期反应的临床治疗和监测预后。在小儿感染性疾病早期，很难 鉴别是细菌感染还是病毒感染。CRP对病毒感染缺乏敏感性，而SAA在细菌和病毒感染早期 均可升高。

文献报道SAA检测方法有两种，【酶联免疫吸附法（ELISA）及间接免疫荧光 （Indirectimmunofluorescence，IFA）检测技术。ELISA法检测可用于高通量标本测定，灵 敏度也比较高，目前也被广泛认可，但其操作比较繁琐，需要多次加样洗涤及孵育步骤，完 成整个实验过程需要3小时左右，需要酶标仪，对于实验人员专业技术要求比高，同时受到 各种环境条件影响，对实验带来诸多不便。

间接免疫荧光检测技术是把抗原细胞固定在载玻片上，荧光染色用荧光显微镜进 行观察，该技术具有高特异性，但由于显微镜观察需要主观判断，对检验人员要求高，并且 依赖于荧光显微镜，使用不便。

免疫层析法（Immunochromatography）是近几年来兴起的一种快速诊断技术，其原 理是将特异的抗体先固定于硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜的某一区带，当干燥的纤维素一 端浸入样品（尿液或血清）后，由于毛细管作用，样品将沿着该膜向前移动，当移动至固定有 抗体的区域时，样品中相应的抗原即与该抗体发生特异性结合，型成肉眼可见的检测带。现 有的免疫层析试纸条产品常用的示踪标记粒子有纳米金、纳米硒、彩色胶乳等等，其中纳米 金应用最为广泛，纳米金也称为胶体金。