[发明专利]基于核酸技术的生物体内生理活性小分子的检测方法

权利要求书

1.一种含有核酸的检测溶液，其特征在于，该检测溶液中包括有富含鸟嘌呤的核酸。

2.根据权利要求1所述的含有核酸的检测溶液，其特征在于，该检测溶液包含天然DNA或RNA，以及其磷酸骨架经过修饰的核酸和具有非天然碱基的核酸。

3.根据权利要求1所述的含有核酸的检测溶液，其特征在于，该核酸在一定条件下形成正平行DNA四链体结构。

4.根据权利要求1所述的含有核酸的检测溶液，其特征在于，所述核酸的核苷酸序列为5’-GTGGGTAGGGCGGGTTGG-3’。

5.一种基于核酸技术的生物体内生理活性小分子的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）特定序列核酸制备：利用固相合成技术制备所设计的单链核酸，经分离纯化后得到权利要求1所述的特定序列的核酸；

2）配制核酸储备液：配制适合pH值及化学组分的缓冲溶液即TE缓冲液待用；取一定量核酸溶于该缓冲液中得到核酸储备液；

3）配制核酸四链体检测液：取一定量核酸储备液，向其中加入一定量的KCl并用缓冲液稀释，经加热退火后得到核酸四链体检测液；

4）生理活性小分子检测：将步骤3）中的核酸四链体检测液与含有待测生理活性小分子的样品以适当体积比混合后孵育反应，然后通过合理的检测手段得到该生物识别过程中的输出信号并由此计算得到待测生理活性小分子的浓度值。

6.根据权利要求5所述的一种基于核酸技术的生物体内生理活性小分子的检测方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

1）DNA制备：利用PCR反应制备所设计的DNA，经凝胶电泳分离，纯化后得到特定序列的DNA片段；

2）配制DNA储备液：配制pH为7.0，含有2.5mMEDTA的50mMTris-HCl缓冲溶液即TE缓冲溶液待用；取一定量步骤1）中的DNA片段溶于该TE缓冲液中，配制浓度为400μM的DNA储备液；

3）配制正平行DNA四链体检测液：取一定量DNA储备液，向其中加入一定量的KCl并用TE缓冲液稀释，最终溶液中含有DNA浓度为20μM，K⁺浓度为200mM；将该溶液置于90℃下水浴加热10min后缓慢降温至室温，然后避光保存待用；

4）生理活性小分子检测：将步骤3）中的正平行DNA四链体检测液与含有生理活性小分子的样品以1:1的体积比混合后置于37oC环境中避光反应2h，然后检测所得样品中的荧光信号，根据样品中的荧光强度的即可得到生理活性小分子的浓度值。

7.根据权利要求6所述的一种基于核酸技术的生物体内生理活性小分子的检测方法，其特征在于，所述生理活性小分子为原卟啉。