[发明专利]新的死亡受体5抗体融合蛋白及其应用

说明书

本发明涉及一种氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示的sDR5‑Fc重组蛋白(ZJ501‑5)及其基因SEQ ID NO：1，并公开了该sDR5‑Fc重组蛋白及其基因在制备治疗免疫性肝病的药物中的作用。且本发明所述的sDR5‑Fc蛋白在体外的生物活性比R&D systems公司的sDR5‑Fc产品的生物活性高3倍，N端剪切变异体的比例只有1％左右，蛋白药物稳定性高，本发明所述的sDR5‑Fc蛋白能明显提高Con A诱导急性自身免疫性肝炎小鼠的存活率，对治疗人类自身免疫性肝病具有潜在的应用价值。

技术领域

本发明涉及重组蛋白，特别是涉及一种新的死亡受体5抗体融合蛋白及其应用。

背景技术

据世界卫生组织统计，现阶段全球肝炎患者与健康人群的比例约为1/12，即每12个人当中就可能存在一位肝炎患者，这一比例是艾滋病感染人群的近十倍。目前，世界各国乙肝、丙肝等肝炎患者接近5亿，占全球人口的1/12。中国是肝炎病人最多的国家，每年近30万人因此死于肝脏相关疾病，比如肝硬化、肝癌。全球每年有超过50万人死于原发性肝癌，而其中多达80％的原发性肝癌是由慢性肝炎引起的。在4亿慢性肝炎患者中，有75％生活在亚洲，而中国是全球肝炎和肝癌负担最沉重的国家，我国每年用于乙肝治疗的费用高达1000亿以上。

肝炎和心脑血管疾病的发生发展的病症表现不尽相同但却有着共同特点，归根究底，其关键步骤都涉及肝细胞、心肌细胞或脑细胞的快速凋亡。细胞凋亡是由于细胞接受胞外的死亡信号，激活细胞内的凋亡机制引起的细胞主动死亡过程，为维持人体内环境稳定所必需，具有重要的生物学作用。但是当心脑血管疾病或肝炎发生时，多重的紧张性刺激如细胞因子、氧化应激和DNA损伤等激活细胞凋亡信号，导致大量的心肌细胞、脑细胞或肝细胞死亡。细胞凋亡是心肌梗死、脑梗死及肝炎致细胞死亡的主要方式，并且被认为是这些疾病发生发展的基本机制，其相关分子也成为治疗心肌梗死、脑梗死及肝炎的关键靶点。抑制细胞凋亡可以有效的阻止肝炎或心脑血管疾病的发展。

死亡受体5(Death receptor,DR5)为肿瘤坏死因子(TNF)受体家族的成员，它是肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF－related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)的特异性、高亲和力受体，在正常细胞表面低表达，在炎症、缺血或癌变的组织内高表达。全长的DR5含有411个氨基酸，属Ⅰ型跨膜糖蛋白。DR5与TRAIL结合后可有效激活胞内信号传导途径，诱导细胞发生凋亡反应。DR5介导的细胞凋亡(图1)与心肌梗死、脑梗死及肝炎诱导的细胞死亡密切相关，其可以作为心脑血管疾病及肝炎的共同药物靶点

sDR5(可溶性死亡受体5，soluble DR5，简称sDR5)是一种可溶性蛋白，主要由DR5的膜外区组成，大小约26kD。人sDR5蛋白通过与细胞膜表面的DR5竞争结合TRAIL，从而阻断或封闭TRAIL与DR5结合的信号通路，减少功能细胞凋亡，减轻功能细胞损伤，以达到防止器官衰竭和病人死亡的作用。另外，sDR5由于是人体自身蛋白，具有毒性小、无免疫原性的优点，极具作为心肌梗死、脑梗死及肝炎等疾病的“广谱”治疗药物的潜质。

现有技术中，R&D systems公司所售的重组人DR5-Fc融合蛋白(科研试剂)在连接之处多了几个不同于已上市的其它融合蛋白药物的氨基酸，活性明显低；稳定性也差，发现有不同比例的N端剪切变异体的存在。这些均给后期的工艺开发和质量标准的制定带来麻烦，不适宜作为生物新药申报。