[发明专利]基于CDH6的EB病毒相关性鼻咽癌诊断试剂盒

说明书

本发明公开了一种CDH6的EB病毒相关性鼻咽癌诊断试剂盒，该试剂盒包含CDH6特异性引物和内参β‑actin特异性引物，所述CDH6特异性引物序列为：正向：5'‑GTTGCCATCCTTCTGTGCAT‑3'，反向：5'‑TTCCTCAGGGTGCCGATATC‑3'；所述内参基因β‑actin引物序列为：正向：5'‑TCACCAACTGGGACGACATG‑3'，反向：5'‑GTCACCGGAGTCCATCACGAT‑3。发明人研究证明在EB病毒相关性鼻咽癌组织中，利用realtime‑PCR技术，检测CDH6异常表达，提示CDH6与miR‑203一样，能够作为EBV相关性鼻咽癌基因诊断和治疗中的分子靶标，CDH6高表达可以提示待测个体有患EB病毒相关性鼻咽癌的可能。本发明鼻咽癌诊断试剂盒具有简便、快速、可靠、特异性好、灵敏度高的优点。

技术领域

本发明涉及一种肿瘤的基因诊断试剂盒，具体地说，是一种鼻咽癌诊断试剂盒。

背景技术

EB病毒（Eptein-Barr virus，EBV)属于γ疱疹病毒中的一种，能感染90%的人类，能在体外转化B淋巴细胞，与鼻咽癌的发生发展密切相关。EB病毒在肿瘤发展的不同阶段表达各种分子，如EBNA1-6、三种潜伏膜蛋白LMP1，2A和2B以及miRNAs等。EB病毒潜伏膜蛋白1（LMP1）EB病毒的主要癌蛋白，能够诱导多种信号通路，如NF-KB、MAPK kinase（ERK，p38和JNK）、JAK/STAT等信号通路，引起上皮细胞形态与表型的改变，促进上皮间质转换（Epithelial-mesenchymal transition，EMT），从而导致肿瘤细胞侵袭转移，在EB病毒相关肿瘤的发生发展过程中具有重要的致癌作用。

在低分化和未分化鼻咽癌组织中，EB病毒潜伏蛋白1几乎都能被检测到，且越来越多的研究结果表明，EB病毒的作用伴随着鼻咽癌的发生发展。MicroRNAs是一类高度保守的非编码小RNA，主要通过与靶基因的3'末端非翻译区互补配对、从而抑制靶基因的转录和表达，影响靶基因的生物学功能，进而调控机体细胞增殖、分化、侵袭转移及病毒免疫逃逸等多种而复杂的生命活动进程。一个miRNA可调控数百个靶基因，一个或不同的miRNAs都可能参与调控多种细胞生物学过程。越来越多的证据表明：miRNAs表达异常与肿瘤的发生发展有密切关系。

钙粘蛋白（Cadherin）家族基因CDH6定位于5号染色体上，人DH6基因的mRNA序列在NCBI的登录号为NM_004932。CDH6参与细胞-细胞之间的信号传递，在胚胎发育及上皮细胞的微管形成等方面的作用与上皮细胞特性分子E-cadherin的作用相反。有文献报道，CDH6异常表达在肾以及神经组织中，与相关癌症如肾癌的预后有重要关系，但CDH6在EB病毒相关性鼻咽癌中尚无研究。

发明内容

本发明的目的在于提出一种EB病毒相关性鼻咽癌的基因诊断试剂盒，在于为EBV相关性鼻咽癌诊断提供一种简便快速、准确可靠、特异性高的基因诊断方法，为待测个体是否患癌的临床诊断提供参考以及作为鼻咽癌治疗的分子靶标。

本发明依据国内外鼻咽癌的分子遗传学研究成果及课题组自身的研究结果，通过对EBV阳性或阴性细胞进行miRNA芯片检测，筛查出异常表达的miRNA。发明人前期研究证明，在EB病毒相关的鼻咽癌中，LMP1能够抑制miR-203的表达，使其低表达或表达缺失。该结果在鼻咽癌组织中也得到证实。因此，miR-203能够作为鼻咽癌在诊断和治疗中的分子标志物。通过在线软件TargetScan发明人对miR-203靶基因进行预测后分析发现，钙粘蛋白家族基因CDH6是miR-203的新的潜在靶基因。

实验结果证明，在EB病毒相关性鼻咽癌组织中，利用realtime-PCR技术，检测CDH6异常表达，因此，提示CDH6能够与miR-203一样，能够作为EBV相关性鼻咽癌基因诊断和治疗中的分子靶标。

本发明的EB病毒相关性鼻咽癌诊断试剂盒为实时定量PCR（real-time PCR）试剂盒，包括CDH6特异性引物和内参β-actin特异性引物；