[发明专利]一种细胞冻存液及其制备方法和应用

权利要求书

1.细胞冻存液在提高冻存神经干细胞复苏后存活率中的应用，其中细胞冻存液，由如下各组分组成：二甲基亚砜8％w/v，淫羊藿总黄酮30ng/ml，多肽1％w/v，bFGF 1％w/v，维生素E 1％w/v，最后用DMEM培养基和胎牛血清按照1∶1的比例定容至100ml，其中多肽序列为DDPAFVDKPPIQEQLEHA。

2.一种神经干细胞冻存方法，其特征在于，包括以下步骤：

A.冻存液制备：制备权利要求1所述的细胞冻存液，将各组分按照常规的操作方法将各组分按照相应的比例混合；

B.细胞悬液制备：培养生长成单层的神经干细胞一瓶，0.20％胰蛋白酶液消化4分钟，弃胰酶液，加入DMEM培养液15ml，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，离心4000转/分，弃上清，加入步骤A冻存液2ml，混均，置入无菌的冻存管内：

C.冷冻：先将冻存管在4℃下冻存30min，然后放入-30℃冻存1h，再放入-80℃冻存3h，最后移入液氮中保存；

D.细胞复苏：取出冻存管快速置于37℃水浴，震荡直至细胞悬液完全融化，然后用5倍DMEM液稀释，1000r/min离心5min，离心去除上清液，再重复3次，所述细胞悬浮浓度为10⁸细胞/ml-10¹⁰细胞/ml。