[发明专利]一种抗骨肉瘤转移生物制剂及其应用

说明书

本发明涉及一种抗骨肉瘤转移生物制剂及其应用，具体的涉及包含mir‑4520‑1及其成熟miRNA的生物制剂在制备抗骨肉瘤转移中的应用。发明对转移性骨肉瘤患者及健康对照人群进行测序，获得其miRNA表达数据，筛选出候选的miR‑4520‑3p。验证实验结果表明miR‑4520‑3p与骨肉瘤密切相关，促进miR‑4520‑3p的表达能有效抑制骨肉瘤细胞的迁移和侵袭。本发明为临床提供新的骨肉瘤转移诊疗靶点，具有很好的应用价值。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体的涉及一种抗骨肉瘤转移生物制剂及其应用，更具体的涉及包含mir-4520-1及其成熟miRNA的生物制剂在制备抗骨肉瘤转移中的应用。

背景技术

microRNA(miRNA)是近年来新发现的一类长度为22-23个核苷酸的非编码小分子RNA，在真核生物中广泛存在。miRNA通过与靶基因mRNA 3'-UTR完全或不完全的互补配对结合，导致靶miRNA降解或翻译抑制来调控靶基因的表达，从而影响细胞增殖、侵袭、分化和凋亡等生物学行为。研究表明miRNA在肿瘤的发生发展中发挥着重要作用，这一发现为肿瘤的诊断和治疗提供了新的思路。但是，到目前为止，国内外关于miRNA在骨肉瘤中的作用及作用机制的报道尚不多见。

骨肉瘤(osteosarcoma，OSA)是一种原发于骨髓腔的高度恶性实体肿瘤。在原发性骨肿瘤中，骨肉瘤的发病率高居于第2位，仅次于浆细胞骨髓瘤。骨肉瘤是从间质细胞系发展而来，以能产生骨样组织的梭形基质细胞和肿瘤细胞产生的骨样组织或不成熟骨为特征。骨肉瘤是临床上最常见的原发性恶性骨肿瘤，一般好发于儿童和青少年期。骨肉瘤约占恶性骨肿瘤30％和所有儿童肿瘤的3-4％，而且预后较差，5年生存率较低。骨肉瘤临床治愈难点在于，即使通过截肢治疗，许多患者也会在一年内死于肺转移。骨肉瘤转移成为骨肉瘤治疗中面临的最重要问题之一。

本发明基于高通量测序方法，对5例转移性骨肉瘤患者及5名健康对照人群进行测序，获得其miRNA的表达数据，进而进行生物信息学分析，选取后备miRNA进行分子生物学验证，结果显示，本发明提供的miR-4520-3p与骨肉瘤转移密切相关，可用于骨肉瘤的临床诊断及预防检测，具有很好的实际应用价值。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抗骨肉瘤转移生物制剂，包含：

(a)上调mir-4520-1及其成熟miRNA的转录和/或促进mir-4520-1及其成熟miRNA的活性的试剂；

(b)药剂学上能接受的载体。

mir-4520-1序列见序列表SEQ ID NO 1，mir-4520-1的成熟miRNA为miR-4520-3p和miR-4520-5p，miR-4520-3p的序列见序列表SEQ ID NO 2，miR-4520-5p的序列见序列表SEQ ID NO 3。

优选的，采用基于RNA的microRNA功能获得性技术和/或基因特异性miR Mimics技术上调mir-4520-1及其成熟miRNA的转录和/或促进mir-4520-1及其成熟miRNA的活性。优选人工合成miR-4520-3p的Mimics或短发夹RNA(short hairpin RNA，shRNA)或通过调控启动子上调mir-4520-1及其成熟miRNA的表达。

本发明的目的在于提供上述抗骨肉瘤转移生物制剂在制备治疗骨肉瘤转移药物或试剂中的应用。

本发明的目的在于提供一种骨肉瘤转移诊断试剂，骨肉瘤诊断试剂能够检测骨肉瘤样本中mir-4520-1及其成熟miRNA的转录或免疫检测方法检测骨肉瘤样本中mir-4520-1的表达情况。