[发明专利]mir-5010及其成熟miRNA在制备骨肉瘤诊疗制剂的应用

说明书

本发明涉及mir‑5010及其成熟miRNA在制备骨肉瘤诊疗制剂的应用，更具体的涉及has‑mir‑5010及其成熟miRNA在制备骨肉瘤转移诊疗制剂的应用。高通量测序分析转移性骨肉瘤患者及原发性骨肉瘤对照，获得其miRNA的表达数据，对候选基因miR‑5010‑5p进行RT‑PCR验证及Transwell实验检测其对细胞迁移和侵袭能力的影响，结果显示，本发明提供的miR‑5010‑5p骨肉瘤转移密切相关，为临床诊断及治疗提供参考，具有很好的临床应用价值。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体的涉及mir-5010及其成熟miRNA在制备骨肉瘤诊疗制剂的应用，更具体的涉及has-mir-5010及其成熟miRNA在制备骨肉瘤转移诊疗制剂的应用。

背景技术

骨肉瘤(osteosarcoma，OSA)是源于间叶组织的恶性肿瘤，以能产生骨样组织的梭形基质细胞为特质，多发生在青少年，严重影响青壮年身心健康，社会危害极大。有资料显示，80-90％的患者确诊前已经发生了全身的微病灶转移，目前，单一肺转移大多进行手术切除，但是对于多发转移灶仍没有办法，因此，骨肉瘤转移成为当前进一步提高生存率的瓶颈，研究揭示骨肉瘤转移机制是临床中迫切需要解决的重大问题。骨肉瘤的病因和转移机理尚不完全清楚，研究表明，某些癌基因、抑癌基因、转移相关基因的异常表达及肿瘤细胞分泌的某些因子和骨肉瘤的发生及转移密切相关。

MicroRNAs(miRNAs)是一种大小约21-23个碱基的单链小分子RNA，是由具有发夹结构的约70-90个碱基大小的单链RNA前体经过Dicer酶加工后生成。miRNA通过特异性结合靶基因来调控其表达，典型作用方式主要有两种：通常情况下，复合物中的单链miRNA与靶mRNA的3’UTR不完全互补配对，阻断靶基因的翻译，从而调节基因表达；另一种作用方式与siRNA类似，当miRNA与mRNA完全互补配对时，Ago2蛋白通过切割mRNA直接导致其降解，实现基因沉默。

发明基于高通量测序方法，对5例转移性骨肉瘤患者及5例原发性骨肉瘤患者对照进行测序，获得其miRNA的表达数据，进而进行生物信息学分析，选取后备miRNA进行分子生物学验证，结果显示，本发明提供的miRNA与骨肉瘤转移密切相关，可用于临床诊断及预防检测，具有很好的临床应用价值。

发明内容

本发明的目的在于提供一种防治骨肉瘤转移试剂，所述试剂包含：

(a)抑制剂和/或抑制剂组合物，所述抑制剂和/或抑制剂组合物下调mir-5010和/或其成熟miRNA的转录和/或阻断mir-5010和/或其成熟miRNA的活性；

(b)药剂学上能接受的载体。

mir-5010的序列见序列表SEQ ID NO 1，mir-5010的成熟miRNA为miR-5010-5p和miR-5010-3p序列见序列表SEQ ID NO 2和SEQ ID NO 3。

优选的，采用反义寡核苷酸、antagomiRs、miRNA海绵、miRNA Erasers、TargetMasking和/或多靶点反义寡核苷酸的方法下调mir-5010和/或其成熟miRNA的转录和/或阻断mir-5010和/或其成熟miRNA的活性。

本发明的目的在于提供mir-5010和/或其成熟miRNA在制备诊断和/或防治骨肉瘤试剂中的应用。

优选的，mir-5010的成熟miRNA为miR-5010-5p，miR-5010-5p在转移性骨肉瘤组中高表达。

进一步，诊断和/或防治骨肉瘤试剂为诊断和/或防治骨肉瘤转移试剂。

进一步，mir-5010和/或其成熟miRNA在制备诊断和/或防治骨肉瘤细胞迁移和侵袭试剂中的应用。