[发明专利]一种检测细胞内CO的荧光探针及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种检测细胞内CO的荧光探针，其特征是，结构式如下：

其中，R为H、-CH₃、-CH₂CH₃或-COOEt。

2.一种如权利要求1所述的检测细胞内CO的荧光探针的制备方法，其特征是，将对硝基苯甲酰氯、二甲基吡咯和三氟化硼乙醚，或对硝基苯甲酰氯、二甲基吡咯衍生物和三氟化硼乙醚反应生成硝基苯基氟硼二吡咯即硝基苯基BODIPY，然后将硝基苯基BODIPY中的硝基还原成氨基，再加入亚硝酸盐和3,5-二甲基苯酚偶氮化反应，最后加入钯盐进行环钯化反应得到目标产物，即检测细胞内CO的荧光探针。

3.如权利要求2所述的一种检测细胞内CO的荧光探针的制备方法，其特征是，步骤如下：

(1)将对硝基苯甲酰氯和二甲基吡咯，或对硝基苯甲酰氯和二甲基吡咯衍生物溶解于溶剂1中，加热回流后冷却，加入溶剂2，加入三氟化硼乙醚升温反后得到5,5-二氟-1,3,7,9-四甲基-10-(4-硝基苯基)-5H-4λ⁴,5λ⁴-二吡咯[1,2-c:2',1'-f][1,3,2]二氮杂硼，即硝基苯基BODIPY；

(2)将硝基苯基BODIPY和甲酸铵溶于溶剂中，然后加入Pd/C搅拌反应后即得氨基苯基BODIPY；

(3)将氨基苯基BODIPY和浓盐酸溶于溶剂中，加入亚硝酸盐溶液，搅拌后，加入3,5-二甲基苯酚的碱溶液搅拌后得到偶氮BODIPY；

(4)将偶氮BODIPY染料溶解于溶剂中，然后加入PdCl₂，室温搅拌过夜后，即得检测细胞内CO的荧光探针。

4.如权利要求3所述的一种检测细胞内CO的荧光探针的制备方法，其特征是，所述步骤(1)的具体步骤为：将对硝基苯甲酰氯和二甲基吡咯，或对硝基苯甲酰氯和二甲基吡咯衍生物解于CH₂Cl₂中，加热回流1-2h，冷却后加入三乙胺、甲苯，待反应10-20分钟后加入三氟化硼乙醚，升温至50-60℃反应2-4小时，旋干，用色谱柱分离，所得固体即硝基苯基BODIPY；

所述的对硝基苯甲酰氯、二甲基吡咯或二甲基吡咯衍生物、三乙胺、甲苯、三氟化硼乙醚及CH₂Cl₂的用量比为7-10：7-20：3.5-5.5：30-50：3-6：20-50，g：g：mL：mL：mL：mL；色谱柱分离洗脱剂比例为V_石油醚：V_二氯甲烷＝4-6：1。

5.如权利要求3所述的一种检测细胞内CO的荧光探针的制备方法，其特征是，所述步骤(2)的具体步骤为：将硝基苯基BODIPY、甲酸铵溶于CH₂Cl₂，然后加入Pd/C，常温搅拌1-3小时后过滤，将滤液旋干得氨基苯基BODIPY；所述的硝基苯基BODIPY、甲酸铵、Pd/C、CH₂Cl₂的用量比例为：5～10：50～70：1～5:10～30，g：g：g：mL。

6.如权利要求3所述的一种检测细胞内CO的荧光探针的制备方法，其特征是，所述步骤(3)的具体步骤为：将氨基苯基BODIPY、浓盐酸溶于DMF中，加入亚硝酸钠水溶液，在0-5℃下搅拌3-4h，然后将其缓慢滴加到3,5-二甲基苯酚的NaOH溶液中，在0-5℃下搅拌4-5h，过滤后的滤渣色谱柱分离，得黄色固体偶氮BODIPY；

所述的氨基苯基BODIPY、浓盐酸、DMF、亚硝酸钠、3,5-二甲基苯酚、NaOH、水的用量比为1-3：3-5：10-15：3-5：3-5：4-8：20-30，g：mL：mL：g：g：g：mL；色谱柱分离洗脱剂比例为V_二氯甲烷：V_石油醚＝1-3：2。

7.如权利要求3所述的一种检测细胞内CO的荧光探针的制备方法，其特征是，所述步骤(4)中的溶剂为CH₃OH；所述的偶氮BODIPY、CH₃OH、PdCl₂的用量比例为5～10：10～30：10～20，g：mL：g。

8.一种如权利要求1所述的检测细胞内CO的荧光探针在检测细胞内CO中的应用。