[发明专利]用于检测6种常见食品致病菌的引物组合及其应用

说明书

本发明公开了一种用于检测6种常见食品致病菌的引物组合及其应用。引物组合由引物组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ组成。引物组Ⅰ由Ⅰ‑F3、Ⅰ‑B3、Ⅰ‑FIP、Ⅰ‑BIP、Ⅰ‑LF和Ⅰ‑LB组成，引物组Ⅱ由Ⅱ‑F3、Ⅱ‑B3、Ⅱ‑FIP、Ⅱ‑BIP、Ⅱ‑LF和Ⅱ‑LB组成，引物组Ⅲ由Ⅲ‑F3、Ⅲ‑B3、Ⅲ‑FIP、Ⅲ‑BIP、Ⅲ‑LF和Ⅲ‑LB组成，引物组Ⅳ由Ⅳ‑F3、Ⅳ‑B3、Ⅳ‑FIP、Ⅳ‑BIP、Ⅳ‑LF和Ⅳ‑LB组成，引物组Ⅴ由Ⅴ‑F3、Ⅴ‑B3、Ⅴ‑FIP、Ⅴ‑BIP、Ⅴ‑LF和Ⅴ‑LB组成，引物组Ⅵ由Ⅵ‑F3、Ⅵ‑B3、Ⅵ‑FIP、Ⅵ‑BIP、Ⅵ‑LF和Ⅵ‑LB组成，依次如序列1至36所示，可用于检测阪崎肠杆菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌、志贺氏菌、蜡样芽孢杆菌、创伤弧菌或空肠弯曲杆菌，具有重大的推广价值。

技术领域

本发明涉及一种用于检测6种常见食品致病菌的引物组合及其应用。

背景技术

阪崎肠杆菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌、志贺氏菌、蜡样芽胞杆菌、创伤弧菌和空肠弯曲杆菌是食品中常见的致病菌，也是重要的食源性致病菌。阪崎肠杆菌是主要通过婴幼儿配方奶粉经消化道感染儿童,引起新生儿脑膜炎、败血症和坏死性结肠炎,致死率高50％～80％。国际食品微生物标准委员会于2002年将阪崎肠杆菌列为对特定人群产生严重的生命危害或产生慢性后遗症的微生物。小肠结肠炎耶尔森氏菌是人畜共患病原菌，它的宿主主要是动物，在肉类、蔬菜、乳制品、牡蛎、蛤和虾等食品中也有检出，引起腹泻；志贺氏菌是引起人类急性感染性痢疾最为常见的病原菌，俗称痢疾杆菌，人类主要通过食用被志贺氏菌污染的食品而感染发病，全身中毒症状和大肠化脓性炎症为主要临床特征，此菌对婴幼儿具有致命性，是重要的食源性致病菌；蜡样芽孢杆菌是一种革兰阳性杆菌，极易污染食物而引起食物中毒，特别是在蛋白质和碳水化合物含量丰富的食品中，如肉类、米饭、奶制品、腐乳、鱼、烧鸡等中，造成呕吐及腹泻症状；创伤弧菌，也被称为海洋弧菌，是一种栖息于海洋中的细菌，若食用了遭创伤弧菌污染的海鲜，极易引起肠胃炎；空肠弯曲杆菌是一种食源性人兽共患病原菌。它的主要宿主是家禽，它主要引起人类的急性肠炎和食物中毒，在部分国家已取代沙门氏菌成为最常见的腹泻病病原菌之一。因此，控制食品特别是鸡肉产品中弯曲杆菌的污染并加强食品中空肠弯曲杆菌的检测极为重要。

基于传统分离方法的国标法GB依然是目前很多检测机构在进行6种常见食品致病菌检测的主要依据。主要包括增菌培养，平板分离，生化鉴定等步骤。检测方法繁琐，检测时间长，灵敏度低，容易发生漏检和错检，传统的检测方法已无法满足目前食品快速检测的要求。近几年发展起来的分子检测技术,特别是PCR技术,在微生物快速鉴定和检测方面的应用,为食源性致病菌的快速检测开辟了新的途径。但是,PCR存在检测时间长、易污染、假阳性率高的缺点,使其应用受到限制。环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermalamplification,LAMP)是近年来发展出的一种敏感、特异、简便、快捷的核酸扩增技术,其原理是在一种具有链置换活性的DNA聚合酶的作用下，识别6～8个区域的4～6条引物，在等温条件下快速、特异地扩增目的基因，可推广应用于快速、准确的检测常见的食源性微生物。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于检测6种常见食品致病菌的引物组合及其应用。

本发明提供的引物组合，为如下(a1)或(a2)或(a3)：

(a1)由引物组Ⅰ、引物组Ⅱ、引物组Ⅲ、引物组Ⅳ、引物组Ⅴ和引物组Ⅵ组成；

(a2)由所述引物组Ⅰ、所述引物组Ⅱ、所述引物组Ⅲ、所述引物组Ⅳ、所述引物组Ⅴ和所述引物组Ⅵ组中的任意两个、任意三个、任意四个或任意五个组成；

(a3)所述引物组Ⅰ、所述引物组Ⅱ、所述引物组Ⅲ、所述引物组Ⅳ、所述引物组Ⅴ或所述引物组Ⅵ；

所述引物组Ⅰ由引物Ⅰ-F3、引物Ⅰ-B3、引物Ⅰ-FIP、引物Ⅰ-BIP、引物Ⅰ-LF和引物Ⅰ-LB组成；

所述引物Ⅰ-F3为如下(b1)或(b2)；