[发明专利]幽门螺杆菌耐药和定量多重基因检测体系及其试剂盒和应用

权利要求书

1.一种幽门螺杆菌耐药和定量多重基因检测体系，其特征在于：包括对菌种鉴定基因16S rRNA进行检测的引物，分别对耐药基因23S rRNA的2143位点、rdxA的148位点、pbp1A的1777位点和gyrA的261位点的进行多态性检测的引物,以及分别对幽门螺杆菌的拷贝数进行定量分析的基因ureC和ß-globin进行检测的引物；所述各引物的正向引物的5’端均设有正向通用引物序列，所述各引物的反向引物的5’端均设有反向通用引物序列；

针对16S rRNA基因的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，针对16S rRNA基因的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；

针对23S rRNA基因的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.21所示，对应23S rRNA基因2143位点为碱基A的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.22所示，对应23S rRNA基因2143位点为碱基G的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.23所示；

针对rdxA基因的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.24所示，对应rdxA基因148位点为碱基C的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.25所示，对应rdxA基因148位点为碱基T的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.26所示；

针对pbp1A基因的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.27所示，对应pbp1A基因1777位点为碱基A的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.28所示，对应pbp1A基因1777位点为碱基G的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.29所示；

针对gyrA基因的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.30所示，对应gyrA基因261位点为碱基C或T的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.31所示，对应gyrA基因261位点为碱基G或A的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.32所示；

针对ureC基因的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.33所示，针对ureC基因的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.34所示；

针对ß-globin基因的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.35所示，以及针对ß-globin基因的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.36所示；

所述正向通用引物的核苷酸序列如SEQ ID No.37所示；

所述反向通用引物的核苷酸序列如SEQ ID No.38所示。

2.根据权利要求1所述的幽门螺杆菌耐药和定量多重基因检测体系，其特征在于：针对16S rRNA和ureC基因的正向引物在检测体系中的终浓度均为200nM；针对16S rRNA、ureC和ß-globin基因的反向引物在检测体系中的终浓度均为100nM；针对ß-globin基因的正向引物在检测体系中的终浓度为100nM；

针对23S rRNA基因的2143位点、rdxA基因的148位点、pbp1A基因的1777位点和gyrA基因的261位点的正向引物在检测体系中的终浓度均为100nM；对应23S rRNA基因2143位点为碱基A的反向引物在检测体系中的终浓度均为300nM；对应23S rRNA基因2143位点为碱基G的反向引物在检测体系中的终浓度均为350nM；对应rdxA基因148位点为碱基C、对应pbp1A基因1777位点为碱基A、对应gyrA基因261位点为碱基C或T的反向引物、对应rdxA基因148位点为碱基T、对应pbp1A基因1777位点为碱基G的反向引物在检测体系中的终浓度均为400nM；对应gyrA基因261位点为碱基G或A的反向引物在检测体系中的终浓度均为450nM。

3.根据权利要求1或2所述的幽门螺杆菌耐药和定量多重基因检测体系，其特征在于：还包括PCR缓冲液、MgCl₂溶液、dNTPs、热启动DNA聚合酶、带荧光的通用标签混合物和DNA模板；所述带荧光的通用标签混合物中包括反向通用引物和带有荧光标记的正向通用引物。

4.根据权利要求3所述的幽门螺杆菌耐药和定量多重基因检测体系，其特征在于：所述荧光标记为CY5或CY3或FAM。