[发明专利]一种无对照品的化学定量分析方法

说明书

技术领域

本发明属于药物分析方法领域，涉及定量分析方法领域，特别的，涉及无对照品的准确化学定量分析方法。

背景技术

对照品是化学定量分析中测量化学成分量值的基本参照，在药物分析中具有重要意义。然而，很多化学成分难以获得足够的对照品，或者其对照品因为理化性质不稳定难以保存，这种情况下很难测量该化学成分的准确量值。同时，制备可靠地化学定量分析对照品需要一个很繁琐的程序，通常需要专业机构制备完成。基于上述原因，无对照品化学定量成为亟待解决的技术问题。

现有技术采用一个类似结构的已知成分作为测定目标的对照品进行量值测定，用两种成分的相对信号响应比例来推测没有对照品的待测成分的含量，由于不同化合物仪器信号响应相对比例受到样品背景物质的影响无法克服，因此这种方法测定的只是一个信号响应的相对值，对于需要了解该定量目标的实际含量的测量目的不适用。另外，人们开发了几种通用检测器以满足无对照品定量分析的要求，如蒸发光散射(ELSD)，氮化学发光检测器(CLND)，以及定量核磁共振仪(q-NMR)等。ELSD的信号响应只与分析目标的分子数目相关，但是这种检测器灵敏度太低，基本不能满足常规分析的要求。CLND的信号与分子中伯氮和仲氮的摩尔数成正比，而且灵敏度很高，但是只适合于含伯氮和仲氮的化合物。定量核磁共振分析是近年来发展起来的定量分析方法，但是与色谱分析相比，q-NMR灵敏度仍然较低，而且仪器很昂贵。

发明内容

为填补现有技术的空白，本发明旨在提供一种采用常用的标准物质对另一种缺乏对照品的待测物质进行绝对化学定量测定的方法。本发明的目的是通过以下技术方案实现的,具体方法为：

1)取含一定量待测成分X的样品A，选择一种与X反应的标准物质C，其中X与C反应生成复合物D；将X与样品A反应，制备成含复合物D的产物B；

2)将步骤①所得产物B进行分离纯化，获得复合物D；

3)分解复合物D，获得X和C的等当量溶液E；

4)标定溶液E中C的含量，即得E中X的含量X₀；

5)以X₀为对照品，进行含量测定，以确定任意含待测成分X的样品中X的含量。

优选的，所述步骤1)中，X与C通过制备成醚、酯、络合或酰胺的方式形成复合物。

优选的，所述步骤2)中，分离纯化复合物D的方法为制备薄层色谱法或制备高效液相色谱法。

优选的，所述步骤3)的分解方法为水解法；优选的，所述水解法为碱水解法。

优选的，所述步骤5)的含量测定方法为滴定法或色谱法。

优选的，所述的待测成分X为苯甲醇、标准物质C为邻苯二甲酸单酰氯、复合物D为邻苯二甲酸苯甲醇单酯。

进一步优选的，本发明提供一种以邻苯二甲酸为基准试剂测定林可霉素注射液中苯甲醇含量的含量测定方法。盐酸林可霉素注射液中含有约1％的苯甲醇，主要作用为止痛剂和防腐剂，但是这种成分在儿童用药中禁用。具体方法如图3所示，具体操作步骤如下：

I)取含一定量苯甲醇的样品a，与邻苯二甲酸单酰氯反应生成含邻苯二甲酸苯甲醇单酯的混合产物b；

Ⅱ)去除混合产物b中游离的邻苯二甲酸和苯甲醇，获得纯品邻苯二甲酸苯甲醇单酯；

Ⅲ)将纯品邻苯二甲酸苯甲醇单酯水解，获得水解溶液c，此溶液中邻苯二甲酸和苯甲醇等当量；

Ⅳ)以基准试剂邻苯二甲酸为对照品测定此溶液中邻苯二甲酸的含量，即得a中苯甲醇的含量X₀，以X₀作为对照品，即可测得任意待测样品中的苯甲醇含量。

进一步优选的，步骤I)中样品a由林可霉素注射液富集获得；

进一步优选的，所述富集方法为萃取或制备高效液相色谱法；更优选的，所述的富集方法为萃取法；所述的萃取溶剂为石油醚、氯仿、乙酸乙酯或正己烷；

进一步优选的，所述步骤I)中邻苯二甲酸苯甲醇单酯的合成路线如下，由邻苯二甲酸制备成邻苯二甲酸酰氯，再与苯甲醇反应生成邻苯二甲酸单酯，工艺路线如下：

，其中R为苯基或苄基，TEA为三乙胺。

进一步优选的，步骤Ⅱ)中纯化样品b的方法为固相萃取法或高效液相色谱法；更优选的，所述固相萃取法的洗脱液条件为：采用1～3倍柱体积的二氯甲烷：乙酸乙酯5:1等度洗脱，再用8倍柱体积二氯甲烷：乙酸乙酯：醋酸为5:1:0.1等度洗脱，然后收集第二部分的洗脱液，蒸干。