[发明专利]一种高脂样品中叶黄素含量的定量测定方法

说明书

技术领域

本发明属于分析化学领域，具体涉及一种高脂样品中叶黄素含量的定量测定方 法。

背景技术

叶黄素是一种含紫罗酮环的二羟基类胡萝卜素，其结构，分子量为568.85。叶黄素含有二个不同的紫罗酮环，β-和ε-紫罗酮环，在各紫罗酮环的第3个C上存在一个功能性羟基，在C-3、C-3’和C-6’处有三个不对称中心，因此理论上有8种立体异构体。叶黄素有多种顺反异构体，自然界中叶黄素最主要来源是由万寿菊中提取的，其以反式异构体为主要存在形式。但叶黄素在受到光照、加热和空气氧化等作用的影响下，可能会发生顺反异构化，产生顺式结构的叶黄素，其分子结构如下：

。

欧盟（Directive94/36/ECE161b）和美国（21CFR73.295）均允许从天然植物中 提取的叶黄素作为食品着色剂使用。我国食品安全国家标准GB2760《食品添加剂使用标 准》和GB14480《食品营养强化剂使用标准》中亦允许使用叶黄素作为着色剂在奶粉、冷冻 饮品、焙烤食品等11种食品中以及部分特殊膳食用食品中使用，且针对不同食品，最大使用 量为0.3mg/kg-150mg/kg不等。因此，对食品中添加的叶黄素进行准确定量尤为重要。

由于自然界的叶黄素主要以反式异构体的形式存在，顺式含量低，分离困难，且至 今没有标准品出售，使得准确定量存在困难。同时，叶黄素为脂溶性物质，作为食品添加剂 或营养强化剂添加到含脂量较高的食品如奶粉中时，易与脂类物质结合使得提取困难。此 外，在叶黄素检测过程中，温度、光照等原因均可使反式结构的叶黄素发生异构化，转化为 顺式叶黄素，但转化率及转化产物不确定，也使其准确定量难以进行。

发明内容

本发明的目的在于提供一种高脂样品中叶黄素含量的定量测定方法，按本发明方 法进行测定，可避免测定过程中叶黄素顺反异构化而造成的测定误差，在精密度、重现性、 再现性、检出限等方面均能满足叶黄素的定量检测要求，适用于奶粉、冰淇淋等高脂食品中 叶黄素含量的准确测定。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种高脂样品中叶黄素含量的定量测定方法，其是将光碘异构化反应获得的含顺式结 构的叶黄素作为对照品，对样品测定过程中转化产生的顺式叶黄素进行定性，再采用色谱 归一化法，根据反式叶黄素在总叶黄素峰面积中所占比例进行校正，获得样品中总叶黄素 含量；

所述高脂食品为脂肪含量高于3%的食品，包括奶粉、冰淇淋。

其具体方法包括如下步骤：

1）对照品的制备：以乙醇为溶剂，将反式叶黄素标准品配制成浓度为800μg/L的标准 溶液，然后将其与等浓度的碘乙醇溶液按体积比1:20混合，摇匀，于日光或日光灯下放置30 min，获得作为对照品的含顺式结构的叶黄素；

2）标准曲线的绘制：取5mg步骤1）所得叶黄素，以含0.1wt%BHT的乙醇溶液溶解并定 容至100mL，分别从中准确移取0.050、0.100、0.200、0.400、1.00mL于25mL棕色容量瓶 中，用含0.1wt%BHT的乙醇溶液定容至刻度，得到浓度为0.100、0.200、0.400、0.800、2.00 μg/mL的系列标准工作液；将所得标准工作液过0.45μm滤膜后，取续滤液分别注入液相色谱 中，测定相应的峰面积，然后以标准工作液的浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准 曲线；

3）样品的预处理：取2g待测样品，加入含0.1wt%BHT的乙醇溶液10mL，混匀，加入10 mL质量浓度10%的氢氧化钾溶液，涡旋振荡1min混匀，再室温避光振荡皂化30min；然后 以10mL乙醚-正己烷-环已烷三元溶剂体系（40:40:20，v/v/v）避光涡旋振荡提取3min， 4500r/min离心3min；重复提取2次后合并提取液，加入10mL水，4500r/min离心3min进 行分层洗涤，重复洗涤1次后合并有机相，室温减压浓缩至近干；

4）含量测定：将步骤3）预处理后的样品用含0.1wt%BHT的乙醇溶液涡旋振荡溶解，并 定容至5mL，过0.45μm滤膜，取续滤液进行液相色谱测定；采用色谱归一化法，根据反式叶 黄素在总叶黄素峰面积中所占比例进行校正，然后根据步骤2）所得标准曲线计算样品中总 叶黄素含量。