[发明专利]一种新型类人胶原蛋白止血敷料

说明书

本发明公开了一种具有良好生物相容性的可吸收的富集钙、锌、铜、铁的新型的类人胶原蛋白止血敷料及其制备方法。该制备方法是利用高密度发酵制备的人源型类人胶原蛋白分别螯合钙、锌、铜、铁四种离子的改性蛋白为原料，利用哺乳动物体内存在的赖氨酰氧化酶为交联剂，通过低温交联反应和冷冻干燥工艺过程，获得了可用于创伤和术后止血的新型胶原蛋白止血敷料。本发明制备方法原料易得，成本低，合成工艺简单易实现，工艺放大容易且重现性好；本发明制备的类人胶原蛋白止血敷料无动物源病毒隐患，止血效果显著，可用作各类创面止血和术后止血，以及生物医学组织工程等相关领域的基础研究与应用。

技术领域

本发明涉及一种新型富集钙、锌、铜、铁元素的类人胶原蛋白止血敷料及其制备方法。

背景技术

胶原蛋白是动物体内的一种纤维蛋白，富含于皮肤、筋腱、骨骼中，具有良好的生物相容性，常被用作重要的生物医用材料原料，可作为吸收性创面止血材料，常利用胶原蛋白被交联后的多孔结构吸收血液膨胀，形成凝血的网架，封闭血管裂口或者创面，并激活血小板，达到止血的目的。目前，对于可吸收性胶原蛋白类创面止血材料，因胶原蛋白来源于动物皮、筋腱等，对人体而言属于一种异源物，可引起过敏等不良反应，表现为发热、嗜酸粒细胞增多、引起伤口的感染；止血速度较慢，对血小板等止血成分的牵拉能力和创面修复能力均不好。此外，异源型动物胶原蛋白还存在一些潜在的动物携带病原的风险。

钙离子是人体内最重要的宏量元素之一，广泛分布于体内各组织器官之中，维系着所有细胞的正常生理功能。钙离子不仅参与了肌肉收缩、骨骼形成、神经传导，还有一个非常重要的作用就钙离子参与了血液凝固和能够促进创伤面的修复。凝血过程主要分为三个阶段：凝血酶原激活物的形成、凝血酶原的激活和纤维蛋白的形成。作为凝血因子IV的钙离子，参与了上述凝血过程的三个阶段。研究表明，钙离子能从血液中“捕获”并活化一种关键凝血蛋白质—凝血酶，必须在一定浓度的钙离子和纤维原蛋白存在时凝血过程才能很好地实现。

发明内容

本发明的目的在于提供一种富集钙、锌、铜、铁元素，并且无潜在病毒隐患和良好的生物相容性以及优异的创面止血修复效果的类人胶原蛋白止血敷料。

本发明另一目的是提供上述类人胶原蛋白止血敷料的制备方法。

本发明的具体过程如下：

一种类人胶原蛋白止血敷料，其采取以下制备方法得到：在以基因工程菌高密度发酵的人源型类人胶原蛋白分别螯合钙、锌、铁、铜离子制备的螯合型重组类人胶原蛋白的水溶液中，加入交联剂赖氨酰氧化酶进行酶法交联、陈化、冷冻和超低温冷冻处理后，进行真空冷冻干燥，Co60照射灭菌，获得最终的可吸收性类人胶原蛋白止血敷料。

所述螯合钙型、螯合锌型、螯合铁型、螯合铜型的重组类人胶原蛋白的质量比为：（500~600）:（10~15）:（10~20）:（1~5），总胶原蛋白溶液质量体积比浓度为5~20% 。

赖氨酰氧化酶质量体积比浓度为0.01~0.5%。

交联反应温度为20~45℃，具体可为20℃、25℃、37℃或45℃等；反应时间为5~48h，具体可为5h、10h、24h或48h等。

上述制备得到的类人胶原蛋白止血敷料的吸水率为3400%，凝血速率可达51s。

本发明所述的交联后样品需进行超低温冷冻和冷冻干燥处理，并通过Co60照射灭菌方可使用。

本发明的优点：

（1）本发明所涉及的胶原蛋白为基因工程菌高密度发酵的人源型胶原蛋白，具有优异的生物相容性、促细胞生长、无动物病毒隐患的特点，以这样蛋白改性的螯合钙、锌、铁、铜元素的胶原蛋白不仅同样保留了原胶原蛋白基质的优点，同时增加了离子辅助功效，大大提升了（术后）创伤面的高止血效果和促进创面愈合的功效；