[发明专利]一种能特异结合前列腺特异性膜抗原的纳米抗体

说明书

本发明属于基因工程领域，具体为针对前列腺特异性膜抗原的单域重链抗体，其具有SEQ ID NO.:1所示的氨基酸序列，可用于免疫检测、抗原富集纯化等领域。本发明所提供的氨基酸序列可以作为前体，通过随机或定点突变技术进行改造，能够获得性质(亲和性、特异性、稳定性等)更好的突变体，用来发展进一步用于医药、工业、农业的蛋白质或多肽。

技术领域

本发明涉及单域重链抗体技术(又称纳米抗体技术)，以及基因工程抗体技术，特别是针对前列腺特异性膜抗原的单域重链抗体或多肽。

技术背景

单域抗体是指由普通抗体可变区(VH或VL)组成的基因工程抗体。单域重链抗体(又称为纳米抗体，VHH抗体，variable domain of heavy chain of heavy-chainantibody)是指仅由重链抗体(heavy-chain antibody)可变区(Variable region)组成的基因工程抗体，其中，重链抗体(heavy-chain antibody)是一种存在于骆驼、鲨鱼等动物体内天然缺失轻链的抗体。单域重链抗体是目前已知的最小的完整抗原结合片段，具有分子量小、渗透性好等特点，目前已广泛用于基础研究、医学诊断和检测、抗体药物开发等领域。

前列腺癌是一种严重威胁老年男性健康的恶性肿瘤，其早期诊断和治疗对于其预后具有重要的意义。前列腺特异性膜抗原(prostate specific membrane antigen，PSMA)是一种位于前列腺细胞膜上的II型跨膜糖蛋白，由750个氨基酸组成，分为胞内区(氨基酸序列为1-18)、跨膜区(19-43)和胞外区(44-750)，相对于传统用于临床检测的前列腺特异抗原(prostate specific antigen，PSA)，是一种更加敏感和特异的前列腺癌肿瘤标记物，尤其是在激素难治性前列腺癌及前列腺癌转移灶中均为高表达，在区分前列腺癌和其他类型恶性肿瘤的敏感度和特异性分别为65.9％和94.5％。另外，在多种非前列腺来源的实体瘤，如肺癌、膀胱癌、胃癌、胰腺癌、肾癌和结直肠癌等，PSMA也高度特异地表达于肿瘤血管内皮细胞上。而且本身具有神经羧基肽酶和叶酸水解酶的活性，加之707个氨基酸组成的胞外区能够提供多个抗原表位等特点，使其成为了肿瘤免疫靶向治疗和分子影像学中重要的研究靶点。

目前，人们发现了多种针对PSMA亦制备了多种能与其发生特异性结合的物质，包括单克隆抗体7E11、J591，适体A9和A10，重组技术得到的ScFv抗体D7、Fab抗体及人源化抗体的报道特别是已经通过美国FDA批准用于前列腺癌的诊断和晚期核素治疗的111In-喷地肽，就是基于针对PSMA的单克隆抗体与放射性核素相连而成。但与单域重链抗体相比，这些配体存在生产成本相对较高，制备过程复杂等缺点。

发明内容

本发明的目的是提供针对前列腺特异性膜抗原的单域重链抗体，可以被用于制备检测前列腺特异性膜抗原的试剂和工具。

本发明提供一个针对前列腺特异性膜抗原的单域重链抗体(即本发明一种能特异结合前列腺特异性膜抗原的纳米抗体)，具有SEQ ID NO.：2所示的氨基酸序列，其氨基酸序列可通过标准化的抗体氨基酸序列编号方法(ImMunoGeneTics，IMGT)进行编号和结构域的划分。

本发明提供一种蛋白质或多肽，其特征是包含框架区中的一个或者两个以上的氨基酸序列，且至少与一个氨基酸序列具有90％同源性。

本发明提供一种蛋白质或多肽，其特征是包含互补决定区中的一个或者两个以上的氨基酸序列，且至少与一个氨基酸序列具有80％同源性。

本发明提供一个核酸分子，其特征是编码SEQ ID NO.：2，通过遗传密码子可以随时获得该核酸分子的具体序列。该核酸分子的序列如SEQ ID NO.：1。

本发明还提供一个核酸分子，其特征是编码SEQ ID NO.：2部分结构域，通过遗传密码子可以随时获得该核酸分子的具体序列。