[发明专利]利用人的尿液细胞构建软骨组织的方法

权利要求书

1.一种利用人尿液细胞体外制备人工体外来源的软骨组织的方法，包括如下步骤：

(1)将人尿液细胞经a)重编程生成诱导多能干细胞，并定向分化为间充质干细胞；或 经b)转分化生成间充质干细胞；

(2)在软骨诱导分化培养基中培养(1)获得的间充质干细胞，得到人工体外来源的软 骨组织。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述a)中将人尿液细胞经重编程生成诱导多 能干细胞的方法为：1)将转录调控因子导入尿细胞或在含有小分子化合物的培养基中 培养尿细胞；2)重编程产生iPS细胞克隆；3)挑取单克隆，继续培养获得诱导多能干 细胞。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述a)中将尿液细胞来源的诱导多能干细胞 定向分化为间充质干细胞的方法为：1)在微孔板中将尿液细胞来源的诱导多能干细胞 分化形成类胚体；2)类胚体悬浮培养分化为中胚层细胞；3)分化为中胚层细胞的类胚 体贴壁培养在含诱导因子bFGF，EGF和PDGF的含血清或无血清培养基中分化为间充质 干细胞。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述b)将人尿液细胞经转分化生成间充质干 细胞的方法为：1)将转录调控因子导入尿细胞或在含有小分子化合物的培养基中培养尿 细胞；2)诱导产生前体iPS细胞克隆；3)转染后第17天，挑取单克隆，使克隆继续增 殖6天；4)换MSC培养基培养9天后细胞得以扩增进行第一次传代。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述软骨诱导分化培养基为无血 清特定培养液。

6.由权利要求1-5中任一条的方法得到的软骨细胞或软骨组织及其应用。

7.一种诱导多能干细胞获得间充质干细胞的方法，包括如下步骤：1)在微孔板中将诱导多 能干细胞分化形成类胚体；2)类胚体悬浮培养分化为中胚层细胞；3)分化为中胚层细 胞的类胚体贴壁培养在含诱导因子的含血清或无血清培养基中分化为间充质干细胞。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤3)中所述诱导因子为bFGF，EGF和PDGF。

9.由权利要求7或8的方法得到的尿液细胞来源的间充质干细胞及其应用。

10.一种在体外将尿液细胞来源的间充质细胞诱导分化为软骨细胞形成软骨组织的方法，其 特征在于，使用诱导分化培养基为无血清特定培养液。