[发明专利]大豆苷元的制备方法

权利要求书

1.大豆苷元的制备方法，其特征在于该方法按以下步骤进行：

一、原料热处理：对原料进行预处理，预处理的具体方法为炒制，炒制时间为103s，炒制温度为130～140℃；所述原料为大豆异黄酮；

二、发酵：

将步骤一炒制过的原料加入到BHI液体培养中，然后接入河生肠杆菌LJ-G1菌液，接种量为5％，发酵条件为：初始pH为7.8～8.2，温度为38～40℃，时间为38～40h；

三、耦合酶解发酵：

将液态黑曲霉β-葡萄糖苷酶稀释8000倍后，与质量分数2％的海藻酸钠缓冲溶液混合均匀，然后用注射器缓慢的滴入到质量分数2％的壳聚糖溶液和质量分数2％的CaCl2溶液组成的混合液中，形成微胶囊，然后将其放于4℃硬化2h，再用真空抽滤机进行抽滤，移至体积分数0.2％的戊二醛中，于40～45℃交联1～1.5h，用蒸馏水洗涤3遍，冲去未结合的游离酶以及固定化酶表面的戊二醛，得到海藻酸钠-壳聚糖-β-葡萄糖苷酶-固定化酶；

待步骤二的发酵时间剩余3～4h时，添加固定化酶于发酵液中，进行耦合酶解发酵，初始pH为6.5～7.5、酶解时间为3～4h，得酶解发酵液；

四、纯化干燥：

将酶解发酵液于3000～3500r/min离心30～40min，取上清液用活性炭进行脱色30～40min，每50mL上清液加入3g活性炭，再经大孔树脂纯化，得到大豆苷元甲醇溶液，旋转蒸发除去溶剂，干燥，制得大豆苷元产品。

2.根据权利要求1所述的大豆苷元的制备方法，其特征在于步骤二中河生肠杆菌LJ-G1菌液的活菌数为55×10⁵CFU/mL。

3.根据权利要求1所述的大豆苷元的制备方法，其特征在于步骤二中炒制过的原料质量与BHI液体培养基的体积比为1g∶166mL。

4.根据权利要求1所述的大豆苷元的制备方法，其特征在于步骤三中稀释后的黑曲霉β-葡萄糖苷酶液与海藻酸钠缓冲溶液的体积比是1∶10。

5.根据权利要求1所述的大豆苷元的制备方法，其特征在于步骤三所述混合液中壳聚糖溶液和CaCl2溶液的体积比为1∶1。

6.根据权利要求1所述的大豆苷元的制备方法，其特征在于步骤三中加了酶的海藻酸钠缓冲溶液与混合液的体积比为11∶20。

7.根据权利要求1所述的大豆苷元的制备方法，其特征在于步骤三中固定化酶的质量与发酵液的体积比为1g∶14.5mL。

8.根据权利要求1所述的大豆苷元的制备方法，其特征在于步骤四中大孔树脂纯化条件为：料液比1∶1.8，pH为4，解析时间为6～7h。