[发明专利]一种检测核糖核酸酶的方法及其试剂盒

说明书

本发明公开了一种检测核糖核酸酶的方法及其试剂盒。本发明提供了一种检测待测样本中核糖核酸酶的方法，包括如下步骤：1)设计合成RNA探针；2)将待测样本和含有所述RNA探针的反应体系混匀，得到反应液；3)检测所述反应液荧光强度，根据荧光强度确定待测样本是否含有核糖核酸酶。本发明的方法优势体现在：1)灵敏度高(0.1pg/ml RNase A，比Ambion高100倍)；2)可实时观测；3)可高通量检测：能同时对大量样本进行检测；反应体积小，成本低，简单快速(1小时左右)，适宜实验室的常规质控；4)广谱性：可检测不同样本中，不同核糖核酸酶的含量和含量；5)安全：不使用任何有害化合物。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种检测核糖核酸酶的方法及其试剂盒。

背景技术

核糖核酸酶(Ribonuclease，RNase)能将RNA底物水解成小分子核酸。大部分核糖核酸酶活性需要二价阳离子(如Ca²⁺、Mg²⁺等)。其中RNase A是一种有广泛应用的核酸内切酶。RNase A对RNA有水解作用，但对DNA则不起作用。

RNase A在嘧啶核苷酸残基C和U的3′端处高效且专一地催化RNA链骨架上的磷酸二酯键的裂开，形成具有2′，3′-环磷酸衍生物的寡聚核苷酸。

RNase是实验室普遍存在的环境污染物，对RNase活性的监测是一个常规质量控制(QC)步骤。另一方面，对RNase的检测方法还可应用于疾病诊断中，如癌症检测。1970年，Reddi首次证实胰腺癌患者血清RNase异常升高(Reddi KK，Holland JF.Elevatedserumribonuclease in patients with pancreatic cancer.Proc Natl Acad SciUSA.1976，73(7)：2308-10)，血清RNase浓度检测可用于胰腺癌诊断。

测量RNase活性的方法有多种，如放射性同位素法(Egly JM andKempfJ.Detection and estimation of very low ribonuclease activities inbiological fluids.FEBS Letters，1976，63：250-254)、分光光度法(Wagner AP，Iordachel MC and Wagner LP.A simple spectrophotometric method for themeasurement of ribonuclease activity in biological fluids.J.Biochem.Biophys.Methods，1983，8：291-297)和荧光淬灭法(James DA and Woolley GA.Afluorescence-based assay for ribonuclease aactivity.Anal.Biochem.，1998，264：26-33)，电化学法(Takenaka,S.S.a.S.(2014).Highly Sensitive Nuclease Assays Based onChemically Modified DNA or RNA.Sensors)等。其中以人工合成的寡聚核糖核酸分子为底物的RNA酶检测技术准确性较高(Witmer MR，Falcomer CM，Weiner MP，Kay MS，BegleyTP，Ganem B andScheraga HA.U-3′-BCIP：a chromogenic substrate for the detectionof RNase A inrecombinant DNA expression systems.Nucleic Acids Res.，1991，19：1-4)。