[发明专利]辣椒素类物质通用人工半抗原、人工完全抗原及其应用有效
申请号: | 201610079136.5 | 申请日: | 2016-02-04 |
公开(公告)号: | CN105541655B | 公开(公告)日: | 2017-09-15 |
发明(设计)人: | 李培武;杨青青;张奇;马飞;张良晓;张文;唐晓倩;丁晓霞 | 申请(专利权)人: | 中国农业科学院油料作物研究所 |
主分类号: | C07C233/22 | 分类号: | C07C233/22;C07C231/02;C07K14/765;C07K14/77;C07K14/795;C07K16/44;C07K16/06 |
代理公司: | 湖北武汉永嘉专利代理有限公司42102 | 代理人: | 乔宇 |
地址: | 430062 湖*** | 国省代码: | 湖北;42 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 辣椒素 物质 通用 人工 半抗原 完全 抗原 及其 应用 | ||
1.辣椒素类物质通用人工完全抗原化合物,其特征在于:其分子结构式如式Ⅱ所示:Pr载体蛋白;所述载体蛋白为牛血清白蛋白BSA、卵清白蛋白OVA或钥孔血蓝蛋白KLH。
2.权利要求1所述的辣椒素类物质通用人工完全抗原化合物的制备方法,其特征在于:它是将辣椒素类物质通用人工半抗原通过N,N’-二环己基碳二亚胺DCC与N-羟基琥珀酰亚胺NHS活化,
或加入三正丁胺和氯甲酸异丁酯,室温反应0.5-3h小时,所得反应液即活化的辣椒素类物质人工半抗原溶液,所述三正丁胺和氯甲酸异丁酯的摩尔比为1:1-1.2,
然后再与载体蛋白进行偶联得到;
所述辣椒素类物质通用人工半抗原化合物的分子结构式为:
3.根据权利要求2所述的辣椒素类物质通用人工完全抗原化合物的制备方法,其特征在于:包括以下具体步骤:
(1)辣椒素类物质通用人工半抗原活化:将辣椒素类物质通用人工半抗原在N,N-二甲基甲酰胺中与N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)室温反应30min-2h,然后加入二环己基碳二亚胺的N,N-二甲基甲酰胺溶液,室温反应4-6小时,4℃静置过夜,取上清液即活化的辣椒素类物质人工半抗原溶液,所述N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和二环己基碳二亚胺的摩尔比为1:1-1.2;
或将辣椒素类物质人工半抗原溶解在N,N-二甲基甲酰胺中顺序加入三正丁胺和氯甲酸异丁酯,室温反应0.5-3h小时,所得反应液即活化的辣椒素类物质人工半抗原溶液,所述三正丁胺和氯甲酸异丁酯的摩尔比为1:1-1.2;
(2)将上述(1)所得活化的辣椒素类物质通用人工半抗原上清液滴加到载体蛋白浓度大于等于2mg/mL的载体蛋白的磷酸盐缓冲液中,室温条件反应4-8h,其中:所述活化的辣椒素类物质通用人工半抗原与载体蛋白的摩尔比大于10:1,然后透析得到辣椒素类物质通用人工完全抗原。
4.根据权利要求2所述的辣椒素类物质通用人工完全抗原化合物的制备方法,其特征在于:所述的载体蛋白的磷酸盐缓冲液是将载体蛋白用0.2M pH 8.0的磷酸盐缓冲液溶解得到的。
5.权利要求1所述的辣椒素类物质通用人工完全抗原化合物在制备辣椒素类物质特异性抗体中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用,其特征在于:应用方法为:将上述辣椒素类物质通用人工完全抗原免疫日本大耳兔,免疫4-6次后,兔颈动脉采血至其死亡,采到的血液离心后,将抗血清利用辛酸-硫酸铵法进行纯化,得到辣椒素类物质通用抗体,即可与辣椒素类物质发生特异性免疫反应的球蛋白。
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