[发明专利]一种抗癌活性蛋白及其应用

说明书

本发明提供一种抗癌活性蛋白，所述蛋白是从黑寡妇蜘蛛的幼蛛中提取得到的分子大小为20～25KDa的蛋白质。在一种具体的实施方式中，所述蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO：1所示。本发明提供的活性蛋白能通过阻滞细胞周期、激活细胞凋亡关键酶等机制抑制HeLa细胞增殖，诱发HeLa细胞凋亡。由于本发明相应提供了它的编码基因序列，为大规模的基因异源表达和样品制备提供了方便，为该蛋白用于抗癌药物的开发提供了条件。

技术领域

本发明涉及生物药物领域，具体涉及一种抗癌活性蛋白及其应用。

背景技术

癌症是人类健康的大敌，世界范围内每年有数以千万计的病人遭受癌症的折磨。癌细胞的重要特点就是丧失凋亡能力，增殖加速、失控。在发展中国家，宫颈癌发病率排在妇科肿瘤的首位，估计世界上每年约有50万妇女罹患宫颈癌。开发和利用高疗效低副作用的药物治疗这种疾病是肿瘤学和妇科学研究工作者面临的重大挑战。近几十年来，许多相关研究工作者一直在竭力探究癌基因影响细胞生理生化过程的机制，寻找能够诱导癌细胞凋亡，抑制其异常增殖的试剂或方法。由于有毒动物(如蛇、蝎、蟾蜍和蜘蛛等)来源的天然毒素中富含具有细胞毒性和抗癌活性的成分，从而成为受人关注的筛选抗癌药物前体分子的宝贵资源。

目前普遍认为，抗癌药物的抗肿瘤效应主要是基于其诱导细胞凋亡、阻断细胞DNA合成、导致细胞DNA损伤和阻断细胞有丝分裂等的作用。有鉴于此，半个多世纪以来，许多研究都集中在利用细胞毒性试剂用于治疗癌症的可能性。很多动物的毒液被证明对来自人宫颈癌细胞系的HeLa细胞具有毒性，提示其中含有抗宫颈癌的活性成分，可以用来作为筛选抗宫颈癌药物的前体分子。

文献调研表明，蛇毒抗癌活性的研究最为广泛。多种蛇的毒液或其蛋白质活性成分被证明对包括HeLa细胞在内的癌细胞具有抑制作用。蝎毒对HeLa细胞的作用则因蝎毒的来源不同而呈现一定的差异。蟾蜍毒液也被实验证明含有较强细胞毒性和抗癌活性的成分。相对而言，蜘蛛毒腺毒液抗癌活性成分研究的报道较少。但如发明专利申请200510120779.1提供了一种蜘蛛毒注射液，它含有活性蜘蛛毒素和注射用溶液。制备时包括以下步骤：1)取活性蜘蛛冻干粉加入适量注射用溶液，轻轻振摇溶解，然后加入注射用溶液稀释至0.5mg～5mg/100ml；2)分装于灭菌过的容器中，1～6℃的低温保存备用。该发明提供的蜘蛛毒注射液主要用于治疗风湿和类风湿、三叉神经痛和坐骨神经痛等神经疼痛，还可用于各种原因引起的机体免疫机能减退及多种癌症。其中，蜘蛛毒取自成年蜘蛛的毒腺，具体可以从虎纹捕鸟蛛、敬钊缨毛蛛、智利蜘蛛、黑寡妇蜘蛛、美国漏斗网蛛、漏斗网蛛、黑腹栉足蛛或狼蛛的毒腺中获取。

另外，黄新、王勤等人发表的《蜘蛛毒素的细胞毒作用研究进展》中也公开蜘蛛毒腺毒素用于抑制癌细胞的研究，如有将雷氏大尤蛛毒素应用于人子宫颈HeLa细胞，蜘蛛毒素在10～40mg/L的浓度里能有效地抑制细胞的增殖，并且有良好的量效和时效关系，形态学上可见细胞凋亡和坏死，而细胞凋亡是caspase-3的上调引起的。

但在抗癌尤其是抑制HeLa细胞的增殖方面，本领域还可以做出进一步的努力，以使得抗癌药的来源更为广泛和多样，或使得药物的抗癌效果更优。

发明内容

本发明从黑寡妇蜘蛛幼蛛提取物中分离纯化出一种具有抗癌活性的蛋白质。该活性蛋白的分子量约为23kDa，已测定出其编码基因的核苷酸序列和蛋白质的全部氨基酸序列。该活性蛋白能诱发HeLa细胞凋亡，抑制HeLa细胞增殖，可用于抗癌药物的开发。

具体地，本发明提供一种抗癌活性蛋白，所述蛋白是从黑寡妇蜘蛛的幼蛛中提取得到的分子大小为20～25KDa的蛋白质。