[发明专利]一种C-肽定量测定试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于糖尿病的辅助诊断技术领域，具体涉及人体血清或尿液中C-肽定量测 定的试剂盒。

背景技术

糖尿病是由于胰岛素分泌缺陷或胰岛素作用障碍所致的以高血糖为特征的代谢 性疾病。C-肽是胰岛β细胞的分泌产物，它与胰岛素有一个共同的前体——胰岛素原。一个 分子的胰岛素原经酶切后，裂解成一个分子的胰岛素和一个分子的C-肽。在使用胰岛素治 疗的糖尿病病人中，胰岛素的测定会受到外源性胰岛素和外周循环抗体的干扰。但进行胰 岛素治疗的病人所检测到的胰岛素抗体对C-肽没有显著干扰。C-肽从人体产生后，不被肝 细胞所摄取，主要在肾脏代谢并从肾脏排出体外。C-肽无生物活性，也不与细胞膜上的受体 结合，且不被降解C-肽的测定方法是比胰岛素本身更为可靠的指示胰岛素分泌水平的方 法。另外，对于应用外源性胰岛素的测定，由于C-肽与胰岛素抗体无交叉反应，不受胰岛素 抗体干扰，外源性胰岛素又不含C-肽，故C-肽测定显得更为重要，从而了解胰岛β细胞功能 情况，对于指导治疗有积极作用。

目前临床上用于测定C-肽的方法主要有放射免疫分析、酶联免疫分析、时间分辨 荧光免疫分析和化学发光免疫分析等。放射免疫分析受方法本身工作原理的限制，其灵敏 度及抗干扰能力差，存在放射线辐射和污染等问题，已基本上退出市场。而酶联免疫分析受 方法学的限制，特异性和灵敏性有待提高，一般作为初筛，现阶段还不能作为定性、定量手 段。时间分辨荧光免疫分析进行超微量分析的时候，会受到激发光的杂散光影响，进而导致 灵敏度受到限制。化学发光免疫分析较其它分析方法高灵敏度、高特异性、操作方便、线性 范围广、分析快，是现阶段的主流分析方法。而找到一种新的、能替代化学发光免疫分析的 技术方法也是至关重要的。

发明内容

本发明采用磁性分离技术与免疫反应结合，通过采用吖啶酯或吖啶磺酰胺或磺酰 胺衍生物作为标记物，提供一种高灵敏度、高特异性、操作方便、线性范围广、分析快速的C- 肽定量检测试剂盒。检测样本既可以是离体血清，也可以是离体尿液，检测结果准确可靠， 且该C-肽定量测定试剂盒在制备过程中添加有防腐剂，使得该试剂盒保存年限久。

本发明提供的利用化学发光磁性微粒免疫检测技术，通过双抗体夹心法定量检测 人血清或尿液中C-肽含量的试剂盒，能快速检测血清或尿液中C-肽含量，且检测结果具有 很高的灵敏度和特异性。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案如下：

一种C-肽定量测定试剂盒，其特征在于：包括抗C-肽抗体包被的磁性微粒、吖啶酯 标记的抗C-肽抗体；

所述抗C-肽抗体包被的磁性微粒包括带有羧基或对甲苯磺酰基的磁性微粒、抗C- 肽抗体、包被缓冲液、保存液、封闭液；

所述吖啶酯标记的抗C-肽抗体由标记物、抗C-肽抗体、标记缓冲液、保存液制备而 成；所述标记物为吖啶酯或吖啶磺酰胺或吖啶磺酰胺衍生物中的任意一种。

优选地，所述带有羧基的抗C-肽抗体包被的磁性微粒还包括活化剂和偶联剂，所 述带有羧基的抗C-肽抗体包被的磁性微粒的制备方法如下：

1)配制所述包被缓冲液、封闭液、保存液、活化剂、偶联剂；

2)抗C-肽抗体预处理：取所述抗C-肽抗体用超滤离心管进行离心，弃掉滤液，往浓 缩的抗体中加入包被缓冲液，继续离心，重复4-6次，然后将离心管倒置离心，浓缩收集抗体 备用；

3)制备抗C-肽抗体包被的磁性微粒：取所述带有羧基的磁性微粒用包被缓冲液清 洗4-6次，磁分离去除上清液，加入活化剂和偶联剂，用漩涡混合器充分混匀悬浮磁性微粒， 反应30-40min；再用包被缓冲液清洗4-6次，磁分离架上去除上清液，添加步骤2)预处理过 的抗C-肽抗体，添加包被缓冲液，在25℃下，用漩涡混合器旋转包被15-20小时；反应完成后 用包被缓冲液清洗4-6次，磁分离去除上清液，加入封闭液，在25℃下，用漩涡混合器旋转包 被4-5小时，最后用保存液清洗4-6次，用保存液稀释后，2-8℃保存。

优选地，所述带有甲苯磺酰基的抗C-肽抗体包被的磁性微粒还包括催化剂，所述 带有甲苯磺酰基的抗C-肽抗体包被的磁性微粒的制备方法如下：

1)配制所述包被缓冲液、封闭液、保存液、催化剂；