[发明专利]一种棘球蚴病诊断抗原及其应用

说明书

本发明提供了一种新的棘球蚴病诊断抗原及其应用。具体地，本发明提供了细粒棘球绦虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂(Echinococcus granulosus Cystatin,EgCystatin)或其基因、或其检测试剂的用途，它们被(i)用于制备细粒棘球绦虫(或细粒棘球蚴)的阳性抗原；和/或(ii)用于制备诊断细粒棘球绦虫(或细粒棘球蚴)的试剂或试剂盒。本发明的该抗原对细粒棘球绦虫的诊断敏感性和特异性均非常高，诊断效能远高于其他常规的细粒棘球绦虫抗原。

技术领域

本发明涉及寄生虫病诊断领域。具体地，本发明涉及一种可用于诊断细粒棘球绦虫(或细粒棘球蚴)的新抗原。

相关资助

本发明受到以下基金的资助：国家自然科学基金(81201315)；国家重大科技专项(2009ZX10004-302)；甘肃省科技支撑计划(1304FKCA120)；卫计委寄生虫病原与媒介生物学重点实验室开放课题(WSBKTKT201305)。

背景技术

细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus)的幼虫(棘球蚴)寄生于人体所引起的细粒棘球蚴病(Cyst echinococcosis)，也叫囊型包虫病(Cystic hydatid disease)，是一种严重危害人体健康和生命安全、影响社会经济发展的人兽共患病，是世界棘球蚴病的主要疾病负担，也是我国重点防治的寄生虫病之一。该病呈全球性分布，具不完全报道，全球至少100个国家存在细粒棘球绦虫的流行。高度流行区主要在欧亚大陆，非洲的北部和东部，澳大利亚及南美洲。我国是世界细粒棘球蚴病的高发区，预计我国该病的疾病负担占据全球的40％。2004年全国人体重要寄生虫病调查表明，棘球蚴病的人均患病率 1.08％，据估算我国有60～130万棘球蚴病人，受威胁人口约6600万，27个省、自治区、直辖市有病例报道，98％是细粒棘球蚴病例，每年细粒棘球蚴病手术病例约2000例。

目前对棘球蚴病的诊断主要以患者自述症状、医生局部体检为依据。由于细粒棘球蚴呈封闭性寄生于人体的内部脏器，传统的病原学方法无法诊断，须辅以物理和其他实验方法。

现行诊断主要以医学影像法为判断标准。B超诊断是目前棘球蚴病诊断与流行病调查的主要方法，但采用B超进行疾病筛查仍存在问题。例如，对检验人员技术水平及经验要求高，极易与肝癌、肝血管瘤及肝囊肿混淆，且很难对 2厘米以内的包囊进行准确诊断。

免疫学检测是人体棘球蚴病重要的辅助诊断方法。当包囊的影像学形态不典型时，免疫诊断具有鉴别诊断的意义；免疫学检测的敏感性和特异性对患者的及时发现与治疗后随访也起到了重要作用；对流行区的流行病学调查、防治规划的制定及防治效果的考核免疫学诊断更具有重要的参考价值。棘球蚴病血清学诊断有着长久的发展史，几乎所有已经出现的免疫学诊断方法都被用于人体棘球蚴病诊断。然而，至今没有一种可行的诊断工具、试剂盒或方法可以普遍应用到棘球蚴病临床实践中。提高人体棘球蚴病血清学诊断试剂的检测效能是我国棘球蚴病防治中亟待解决的问题。

由于循环抗原检测的低敏感性，抗体检测仍然是棘球蚴病临床诊断和流行病普查中使用最广泛的方法。抗体检测的敏感性和特异性与实验中所用的抗原密切相关。细粒棘球蚴病的抗原可来源于囊液、原头蚴、囊壁。其中囊液抗原研究的最多，是目前最主要的诊断抗原来源。囊液成分复杂，有虫体分泌物及虫体表面脱落的物质，具有很强的抗原性。但不同宿主及同一宿主的不同寄生部位，囊液的抗原性相差很大，据报道其敏感性可达75％～95％，但其特异性不高，且常与其他绦虫、线虫和吸虫有交叉反应。

天然来源的粗囊液成分复杂性，不宜于进行质量控制和标准化，产量低，是目前细粒棘球蚴病血清学诊断试剂效能低，产品不能标准化的重要原因。

分析粗抗原组分，采用基因工程的方法制备重组抗原替代天然抗原，是解决上述问题，提高细粒棘球蚴病诊断试剂效能的一种重要途径。