[发明专利]一种整合型慢病毒载体表达系统有效
| 申请号： | 201610083059.0 | 申请日： | 2016-02-05 |
| 公开（公告）号： | CN107043785B | 公开（公告）日： | 2021-04-27 |
| 发明（设计）人： | 姜军;吴庆;陈琛;沈浩 | 申请（专利权）人： | 上海吉凯基因医学科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867 |
| 代理公司： | 上海光华专利事务所(普通合伙) 31219 | 代理人： | 严晨;许亦琳 |
| 地址： | 200233 上海市*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 整合 病毒 载体 表达 系统 | ||
1.一种整合型慢病毒载体表达系统，包括KL15490载体、pHelper 1.0载体和pCMV-VSV-G载体和宿主细胞，将系统中的KL15490载体、pHelper 1.0载体和pCMV-VSV-G载体共同转染宿主细胞后，即在宿主细胞中包装获得慢病毒载体，所述KL15490载体由AddgenepRRLSIN.cPPT.PGK-GFP.WPRE(Plasmid#12252)改造获得，具体为将AddgenepRRLSIN.cPPT.PGK-GFP.WPRE(Plasmid#12252)中的hPGK promoter-EGFP替换为EF1αpromoter-MCS-3FLAG-CMV promoter-EGFP-T2A-Puromycin，所述EF1αpromoter-MCS-3FLAG-CMV promoter-EGFP-T2A-Puromycin的序列如SEQ ID NO:1所示，所述宿主细胞为293T细胞。
2.权利要求1任一权利要求所述的整合型慢病毒载体表达系统在慢病毒载体制备领域的用途。
3.一种整合型慢病毒载体的制备方法，使用如权利要求1所述的整合型慢病毒载体表达系统，包括如下步骤：
a)将KL15490载体、pHelper 1.0载体和pCMV-VSV-G载体共同转染宿主细胞；
b)培养宿主细胞；
c)分离获得整合型慢病毒载体。
4.如权利要求3所述的一种整合型慢病毒载体的制备方法，其特征在于，所述步骤a)中，将KL15490载体、pHelper 1.0载体和pCMV-VSV-G载体共同转染宿主细胞前，还将目的基因克隆入KL15490载体。
5.如权利要求3所述的一种整合型慢病毒载体的制备方法，其特征在于，所述KL15490载体包括序列如SEQ ID NO:1所示的慢病毒载体表达框。
6.如权利要求5所述的一种整合型慢病毒载体的制备方法，其特征在于，所述KL15490载体由Addgene pRRLSIN.cPPT.PGK-GFP.WPRE(Plasmid#12252)改造获得，具体为将Addgene pRRLSIN.cPPT.PGK-GFP.WPRE(Plasmid#12252)中的hPGK promoter-EGFP替换为EF1αpromoter-MCS-3FLAG-CMV promoter-EGFP-T2A-Puromycin，所述EF1αpromoter-MCS-3FLAG-CMV promoter-EGFP-T2A-Puromycin的序列如SEQ ID NO:1所示。
7.如权利要求3所述的一种整合型慢病毒载体的制备方法，其特征在于，所述宿主细胞为293T细胞。
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