[发明专利]RNASE4作为药物靶点在脑胶质瘤抑制药物中的应用

说明书

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及一个新的脑胶质瘤治疗靶点，具体而言，涉及将核糖核酸酶4蛋白作为脑胶质瘤治疗靶点，还涉及核糖核酸酶4的siRNA、shRNA和中和性抗体，包括使用该siRNA、shRNA和中和性抗体制备的药物作为靶向抑制脑胶质瘤生长的应用。

背景技术

脑胶质瘤泛指各种神经上皮来源的肿瘤，是中枢神经系统中最常见的恶性肿瘤，约占全部颅内肿瘤的35％～60％。术语“脑胶质瘤”涵盖了一类脑部肿瘤，包括星形细胞瘤、少突神经胶质瘤、髓母细胞瘤、室管膜瘤。胶质瘤均呈恶性浸润性生长，即使外科手术也难以做到病理学的全切除，因而胶质瘤术后复发率非常高，是青年和成年人肿瘤死亡的第二大病因。由于颅内病变位置的特殊性，术后生存者多并发神经功能性障碍、生活质量低下等。因此，如何提高胶质瘤患者的治愈率和生存率是当前胶质瘤基础研究和临床实践中迫切需要解决的问题。

目前认为，诱发脑胶质瘤发生和发展的因素多样，且具有不确定性。迄今已发现诸如病毒感染、遗传因素以及癌基因和抑癌基因异常与胶质瘤关系密切。p53、p16^Ink4a、PTEN和EGFR等基因突变会影响细胞信号转导和细胞周期等生物学过程，最终导致脑胶质瘤的产生和恶化。脑胶质细胞内RNA生物代谢的紊乱也可能导致其癌变，如非编码RNA异常调控(包括上调、下调和突变)、mRNA发生可变剪接、RNA表观遗传学修饰等都与胶质瘤的发生和发展密切相关。然而，脑胶质瘤发生和发展中引起RNA的生物代谢紊乱的分子机制仍不清楚，寻找和发现导致脑胶质瘤组织内RNA生物代谢的关键信号通路及调控因子，将为治疗脑胶质瘤提供新的靶点。

核糖核酸酶4(Ribonuclease-4，RNASE4，以下用“RNASE4”简写代表“核糖核酸酶4”)是人核糖核酸酶家族第四个成员。

成熟的RNASE4是一个由119个氨基酸残基组成的分泌型单链碱性蛋白质，相对分子量约为13.8kDa。RNASE4作为核糖核酸酶A超家族的成员，主要通过水解底物RNA参与各种生物学过程。与家族其它成员相同，RNASE4专一性水解RNA链上的嘧啶核苷酸3'端的5'-磷酯键，进而产生寡核苷酸或核苷酸。RNASE4保留了该家族共有的结构特性，包括三个酶催化位点(His-12，Lys-40和His-116)、保守序列CKXXNTF(XX为任意氨基酸)和由8个半胱氨酸残基形成的分子内二硫键(Cys25-Cys81,Cys39-Cys92,Cys57-Cys107和Cys64-Cys71)。然而，RNASE4又具自身的结构特征。与牛胰核糖核酸酶A(RNaseA)结构相比较，该酶的C端缺少了核糖核酸酶活性位点Ser-123，并且核酸催化结合结构域中的一些氨基酸残基也被相应的替换，例如RNaseA上Pro-42、Val-43和Lys-104分别被RNASE4上Arg-41、Phe-42和Arg-101替换。以上独特的结构导致RNASE4有别于其它核糖核酸内切酶，即更偏好于水解尿嘧啶核苷酸而非胞嘧啶核苷酸。此外，RNASE4是整个核糖核酸酶A超家族中进化最为保守的成员。RNASE4的一级序列在脊椎动物中的相似度高达90％，远高于家族其它成员。RNASE4这种高度的物种间保守性和独有的尿嘧啶核苷酸酶切偏好性，提示该酶可能通过其独特的核糖核酸酶活性执行一些基本的生物学功能。然而，RNASE4是否能够作为上述脑胶质瘤治疗靶点及作用机制仍未知。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种RNASE4作为药物靶点在脑胶质瘤抑制药物中的应用。

为了解决上述技术问题，本发明提供RNASE4作为药物靶点在脑胶质瘤抑制药物中的应用，所述RNASE4为核糖核酸酶4蛋白，其具有SEQIDNO：1所示的氨基酸序列。

作为本发明的RNASE4作为药物靶点在脑胶质瘤抑制药物中的应用的改进：通过靶向抑制核糖核酸酶4的表达或者活性，从而实现靶向抑制脑胶质瘤生长。

作为本发明的RNASE4作为药物靶点在脑胶质瘤抑制药物中的应用的进一步改进：所述靶向抑制核糖核酸酶4表达的方法为：通过慢病毒介导shRNA或者转染试剂介导siRNA的转染，将上述shRNA或者siRNA转入胶质瘤细胞，沉默胶质瘤细胞内核糖核酸酶4蛋白的表达。

作为本发明的RNASE4作为药物靶点在脑胶质瘤抑制药物中的应用的进一步改进：所述siRNA/shRNA的核苷酸序列为以下任一：SEQIDNO：2，SEQIDNO：3、SEQIDNO：4。