[发明专利]一种微生物转化的方法

说明书

本发明涉及采用普罗维登斯菌属微生物转化L‑酪氨酸生产R‑(+)‑3‑(4‑羟基苯基)‑2‑羟基丙酸。该方法过程简单，具有重要的工业应用价值。

技术领域

本发明采用普罗维登斯菌转化L-酪氨酸生产D-4-羟基苯乳酸，属于工业微生物领域。

背景技术

D-4-羟基苯乳酸，又名对羟基苯乳酸，学名为R-(+)-3-(4-羟基苯基)-2-羟基丙酸，英文名为：D-4-hydroxyphenyllactic acid、D-p-Hydroxyphenyllactic acid，R-(+)-2-hydroxy-3-(4-hydroxyphenyl)propanoic acid。

4-羟基苯乳酸是乳酸菌发酵过程中产生的除苯乳酸外的另一种广谱、低毒的生物防腐剂，当前主要通过乳酸菌生成(中国专利CN200810244053.2)。4-羟基苯乳酸是乳酸菌发酵过程中产生的除苯乳酸外的另一种广谱、低毒的生物防腐剂，当前主要通过乳酸菌生成(中国专利CN200810244053.2)。有也文献表明，普通变形杆菌(Proteus vulgaris)可将L-酪氨酸转化成D-4-羟基苯乳酸(The influence of conditions of bacterialcleavage of proteins on the cleavage products,1917,J.Biol.Chem.527-532)。

基于D-4-羟基苯乳酸的重要应用价值，本专利提出了普罗维登斯菌属微生物转化L-酪氨酸生产D-4-羟基苯乳酸的方案。L-酪氨酸当前主要通过微生物发酵法生产，原料丰富易得。

普罗维登斯菌(Providencia)是一类可使苯丙氨酸氧化脱氨的革兰氏阴性细菌。现有主要8个种：产碱普罗威登斯菌(Providencia alcalifaciens)、斯氏普罗威登斯菌(Providencia stuartii)、雷极普罗威登斯菌(Providencia rettgeri)、害虫普罗威登斯菌(Providencia vermicola)、Providencia sneebia、Providencia burhodogranariea。普罗维登斯菌具有强大的氧化脱氨能力(Sherris Medical Microbiology，2004，4th ed.)，L-酪氨酸可以被普罗维登斯菌氧化脱氨成4-羟基苯丙酮酸，然后再还原成D-4-羟基苯乳酸。4-羟基苯丙酮酸虽然是更为直接的底物，但价格昂贵且不稳定，因此L-酪氨酸是最佳的底物。普罗维登斯菌是一种兼性厌氧菌，可以在厌氧条件或好氧条件下转化生产D-4-羟基苯乳酸，具有高转化率和高纯度的特点。

发明内容

本发明通过培养普罗维登斯菌属微生物菌体，转化L-酪氨酸生产D-4-羟基苯乳酸，技术方案如下：

1、菌株

本发明所用的菌株有购自美国ATCC菌种库的Providencia alcalifaciens ATCC9886、Providencia rustigianii ATCC 33673、Providencia sneebia ATCC BAA-1589、Providencia rettgeri ATCC 29944、Providencia heimbachae ATCC35613、Providenciastuartii ATCC 33672、Providencia burhodogranariea ATCC BAA-1590以及购自中国工业微生物菌种保藏管理中心的Providencia rettgeriCICC 10488和中国典型培养物保藏中心的Providencia vermicola CCTCC AB205297。

2、菌体培养