[发明专利]一种银耳胶原蛋白肽的提取方法

说明书

技术领域

本发明公开了一种银耳胶原蛋白肽的提取方法，属于胶原蛋白肽制备技术领域。

背景技术

胶原蛋白是一种高分子蛋白质，丝状的胶原蛋白纤维，能使皮肤保持结实而有弹性。胶原蛋白具有很强的生物活性和生物功能，能参与细胞的迁移、分化和增殖，使骨骼、肌腱、软骨和皮肤具有一定的机械强度。胶原蛋白肽是胶原蛋白在一定的化学作用或酶的作用下发生“水解”反应后得到的分子量在10000dalton以下的产物。胶原蛋白肽具有独特的生理活性，它不仅有蛋白质的营养特性，消化吸收率可达100％，而且有保护胃粘膜、抗溃疡、抗氧化、抗过敏、抗肿瘤、抗衰老、降血压、降胆固醇、增强骨强度、预防骨质疏松、预防关节炎、促进伤口愈合、促进角膜上皮细胞的修复和生长、促进皮肤胶原代谢、免疫调节等多种生理功能。

近年来，胶原蛋白肽已广泛应用于生物、医疗、食品、化妆品等诸多领域。胶原蛋白肽的用范围也日趋广泛，其需求量正逐年增长。以往提取胶原蛋白肽的原料它们主要来源于畜禽动物组织，但由于宗教和习俗等原因，有些地区不能使用。再加上近年来，由于疯牛病和口蹄疫的影响，人们已经开始转向从鱼类中提取胶原蛋白肽，因为其所提取的胶原蛋白肽更为安全。

目前胶原蛋白肽的制备主要方法有：高温高压蒸煮法、酸法、酶法、酸法和酶法相结合。

（1）高压蒸煮法能够快速提取胶原蛋白肽，然而该工艺的高压在生产中易引发安全问题，制备的样品分子量分布广，均匀度较差；

（2）酶法提取是目前用得较多的方法，根据胶原蛋白的结构特点选择合适当的酶提取；但该工艺制备的产品分子量较集中，产品附加值较高，但由于鱼鳞除了胶原蛋白外还含有大量的无机盐、脂肪等杂质，这些杂质影响酶的酶活，使得酶提取胶原蛋白肽的产率太低，难以满足产业化大规模生产；

（3）酸法提取虽降低成本，但单一的酸法提取得到的产品分子量分布广，均匀度差；

（4）酸法与酶法结合提取可以提高产率，制备产品的分子量较集中，但产率仍然很低，造成浪费。

上述的传统方法存在以下问题：

①工艺复杂：这些方法都需要经历除杂蛋白、去除脂肪，提取胶原蛋白再酶解胶原蛋白得到胶原蛋白肽这几个程序，工艺复杂；

②污染环境：为了去除皮上的杂蛋白和脂肪，需要加入化学试剂，带来了环境污染的问题；

③成本高：以上这些方法，程序多工艺复杂，生产成本高，再加上需要加入昂贵的蛋白酶，进一步增加了生产成本。

发明内容

本发明主要解决的技术问题：针对目前传统方法在提取胶原蛋白肽的过程中，原料主要源于畜禽动物组织，由于疯牛病和口蹄疫的影响，原料对于人体危害较大，且在制备过程中程序工艺复杂，需要加入化学试剂，带来了环境污染的问题，另外还需要加入昂贵的蛋白酶，增加了生产成本的现状，提供了一种以淀粉和磁性粉末制得固定化蛋白酶，将银耳作为原材料，经预处理后酶解，干燥，从而得到银耳胶原蛋白肽。该方法工艺简便，原料易得，在制备过程中避免了漂白剂、氧化剂等化学试剂，对环境无任何污染问题，利用固定化蛋白酶代替游离蛋白酶，使用后可以回收，降低了生产成本，使得最终制得的蛋白酶产率高达90％以上、纯度高达95％以上，适合大规模应用。

为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：

（1）称取30～40g可溶性淀粉溶于300～400mL去离子水中，装入带有搅拌器和温度计的1L三口烧瓶中，再加入1～2mL浓度为0.2mol/L氯化亚铁溶液和2～3mL质量浓度为30%双氧水，启动搅拌器以300～400r/min转速进行搅拌；

（2）在搅拌过程中滴加35～45mL浓度为1mol/L的烧碱溶液，控制滴加速度使其20～30min内滴加完毕，再将三口烧瓶移入油浴锅，加热升温至100～110℃，保持油浴温度不变，继续搅拌反应3～4h后放入温度为4～6℃冰水浴中，静置沉淀10～12h后过滤得到滤渣，干燥后得到磁性淀粉微球；

（3）称取5～10g木瓜蛋白酶和3～5g碱性蛋白酶加入400～500mL磷酸缓冲液中，放置在超声振荡仪中，以100～200W功率超声振荡25～35min后，加入20～30g上述制得的磁性淀粉微球，继续振荡8～10h，将反应液用卧式离心机以8000～9000r/min的转速离心10～15min，分离去除上清液，得到固定化蛋白酶，备用；