[发明专利]一种提高多粘芽孢杆菌产抗真菌物质的方法

说明书

本发明得到天津市自然科学基金13JCYBJC25500资助。

技术领域

本发明属于发酵工程技术领域，涉及一种利用维生素C提高多粘类芽孢杆菌产抗 真菌物质的方法。

背景技术

在真菌引起的植物病害现已成为经济农作物和药用植物稳产、高产、优产的主要 障碍，这些会导致经济上的损失，还会产生对人类身体有害的霉菌毒素，使得真菌病害的防 治显得更为重要。目前使用的杀真菌剂大部分会造成环境风险，所以可以取代这些化学物 质环境友好型的生物防治物质成为研究热点。

真菌病害是植物病害中最重要的一类，可占到植物病害的80％以上，约3万种，导致发 展中国家的农作物损失超过了12%。真菌既危害生长期的作物，又危害采摘后的作物产品， 如镰刀菌属能感染植物的根和其它部位，灰葡萄孢菌能引起200多种植物的绿色组织病变 并且可以使储存中的水果变质。真菌引起的植物病害现已成为经济农作物和药用植物稳 产、高产、优产的主要障碍，使得真菌病害的防治显得更为重要。我们采取了使用杀真菌剂 来对抗这些病原体，但这些杀菌剂大部分会造成环境风险，所以可以取代这些化学物质环 境友好型的生物防治物质成为研究热点。芽孢杆菌类的菌株可以产生多种抗菌药物，包括 羊毛硫抗生素、脂肽和大环内酯物等。目前促进多粘芽孢杆菌产抗菌物质的手段大多采用 基因分子手段，但是，由于基因操作本身过程相对繁琐、实验周期相对较长的限制，加之构 建载体再生过程中外源基因的导入或內源基因的修饰均可能导致整个代谢途径的扰动，从 而影响目标代谢途径物质流和能量流分配,最终影响抗真菌物质的形成。因此，寻找一种更 为简单且有效的方法尤为重要。由于外源还原剂（如GSH和微生物C）的添加可以够影响到细 胞所处环境氧化还原态势，目前，通过外源还原剂的添加来调节生物所处外部环境的氧化 还原电势，促进1,3-丙二醇、(R,R)-2,3-丁二醇等目标产物的积累已有报告。但利用外源 还原剂VC来提高产抗真菌物质的报道尚未见到。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种利用维生素C促进多粘类芽孢杆 菌产抗真菌物质的方法，包括如下步骤：

（1）种子培养：将多粘类芽孢杆菌(P.polymyxa)CJX-518保藏编号为CGMCCNO.7096在 种子培养基中培养，得到一级种子；将一级种子在种子培养基中培养，得到二级种子；上述 的种子培养基成分以g/L计：淀粉30，葡萄糖5，酵母浸粉2，蛋白胨4，MgSO₄^.7H₂O0.5， NaCl0.5，K₂HPO₄1.5，121℃蒸汽灭菌20min；

（2）发酵培养：按体积百分比为1%的接种密度将一级种子接入发酵培养基中，搅拌转速 为200rpm，温度为37℃条件下发酵72h，当发酵4h时，不同实验组分别添加10、30和200mg/L 的维生素C水溶液

所述发酵培养基由下述成分以g/L计组成：葡萄糖20，酵母浸膏粉3，NaCl1，KH₂PO₄2，(NH4)₂SO₄1，MgSO₄·7H₂O0.3，KCl0.2，CaCl₂0.02，FeSO₄·7H₂O0.002，MnSO₄·H₂O 0.002，pH为7.0。

本发明涉及的多粘类芽孢杆菌（Paenibacilluspolymyxa），命名为Paenibacillus polymyxaCJX-518。并保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（China GeneralMicrobiologicalCultuerCollectionCentre），保藏号:CGMCC7096。保藏地 址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101，多粘类 芽孢杆菌保藏的时间2013-01-08。