[发明专利]猴B病毒抗体的免疫梳检测试纸及制备方法和应用

权利要求书

1.一种用于构建猴B病毒抗体的免疫梳的SOE-PCR引物组，其特征在于，引物BVF：如序 列表SeqNo.1所示，引物BVR1：如序列表SeqNo.2所示，引物BVR2：如序列表SeqNo.3所示。

2.一种用于制备猴B病毒抗体的免疫梳的重组表达载体pGEX-4T-BV，其特征在于，序列 如序列表SeqNo.4所示。

3.一种用于制备猴B病毒抗体的免疫梳的重组表达载体pGEX-4T-BV的构建方法，其特 征在于，包括如下步骤：

（1）根据猴B病毒的基因序列，设计SOE-PCR扩增引物，引物BVF：如序列表SeqNo.1所 示，引物BVR1：如序列表SeqNo.2所示，引物BVR2：如序列表SeqNo.3所示；

（2）进行SOE-PCR扩增猴B病毒基因；

（3）猴B病毒基因的回收；

（4）克隆质粒pMD18T-BV的构建及测序；

（5）表达载体pGEX-4T-BV的构建，序列如序列表SeqNo.4所示。

4.根据权利要求3所述的一种用于制备猴B病毒抗体的免疫梳的重组表达载体pGEX- 4T-BV的构建方法，其特征在于，所述的步骤（2）采用SOE-PCR反应的具体步骤如下：

第一轮PCR反应条件：

将混合液在95℃预变性5min，94℃变性1min，60℃退火30s，72℃延伸1min，15 个循环，72℃总延伸10min；

上述混合液如下所示：

BVF引物 1 μL BVR引物 0.5 μL 2×Taq MasterMix 15 μL 超纯水 补足至30 μL

第二轮PCR反应条件：

将混合液在95℃预变性5min，94℃变性1min，63℃退火30s，72℃延伸1min，30 个循环，72℃总延伸10min；

上述混合液如下所示：

。

5.根据权利要求3所述的一种用于制备猴B病毒抗体的免疫梳的重组表达载体pGEX- 4T-BV的构建方法，其特征在于，所述的步骤（5）pGEX-4T-BV的构建方法具体步骤如下：利用 EcoRⅠ与XhoⅠ分别将pMD18T-BV和pGEX-4T-1进行双酶切，并胶回收酶切的目的片段，将回收 的目的片段进行连接，将连接产物转化到BL21（DE3）pLysS感受态细胞中，利用氨苄青霉素 抗性筛选阳性菌落，并提取质粒进行SmaⅠ和EcoRⅠ双酶切鉴定，将鉴定阳性的质粒命名为 pGEX-4T-BV。