[发明专利]一种延胡索快速鉴别方法

权利要求书

1.一种延胡索快速鉴别方法，其特征在于，通过针对延胡索的一对特征引物的聚合酶链式反应，对延胡索进行快速鉴别，该方法包括以下步骤和条件：

(1)将收集的各批供试药材，经乙醇擦拭表面，晾干，用液氮冷冻研磨成粉末，取研碎后的粉末60mg，用DNeasy Plant Mini Kit DNA提取试剂盒提取总DNA，备用；

(2)取特征引物P2，P4加无菌水稀释成10μmol/μL，备用；

(3)PCR扩增：50μl体系中含有浓度为10μmol的P2、P4上下游引物各1μL，模版DNA 2μL，

Prime STAR HS聚合酶预混体系25μL，剩余体积用无菌蒸馏水补足；通过PCR反应程序获得扩增产物；

(4)取步骤(3)扩增产物5μL，与6×Loading buffer 1.0μL混匀后点于1.5％琼脂糖凝胶上，用1×TAE电泳缓冲液在110V电压恒压电泳20min；

取出凝胶，置于紫外灯下观察，并用CAMAG成像系统拍照并保存；

(5)步骤(4)所得照片中显示，正品延胡索在200～300bp之间有一条清晰条带，其他伪品在该位置均无条带，阴性无干扰；

所述的特征引物P2 5'-CTGTGGCCCTCCGGGTTT-3'，

P2反转序列5'-AAACCCGGAGGGCCACAG-3'，

P4 5'-GAGTCGCCCCCATCCCTCTAC-3'。

2.根据权利要求1所述的延胡索快速鉴别方法，其特征在于，其还包括以下步骤：

(6)对步骤(1)～(5)进行耐用性考察：分别考察DNA聚合酶、PCR仪对该延胡索快速鉴别方法的影响，分别更换DNA聚合酶为Taq聚合酶，更换PCR仪为荧光定量PCR仪。

3.根据权利要求1所述的延胡索快速鉴别方法，其特征在于，所述乙醇为95％乙醇。

4.根据权利要求1所述的延胡索快速鉴别方法，其特征在于，步骤(3)所述的PCR反应程序为：94℃预变性2min；94℃变性10s，68℃退火5s，72℃延伸30s，并进行30个循环；72℃延伸5min；获得扩增产物。