[发明专利]一种从荔枝果肉中提取α-葡萄糖苷酶抑制剂的方法

说明书

本发明提供一种从荔枝果肉中提取α‐葡萄糖苷酶抑制剂的方法，以荔枝果肉冷冻干燥粉末为原料，经超声提取，固相萃取柱去糖，凝胶树脂梯度洗脱，旋转蒸发，半制备，最后得到一种对α‐葡萄糖苷酶具有较高抑制活性的单体，为槲皮素3‐O‐芸香糖‐(1→2)‐O‐鼠李糖苷。该物质是荔枝果肉中含量最高的黄酮糖苷类物质。本方法提取步骤简单，耗能较少。提取过程的有机溶剂可回收利用，不产生有机污染。提取过程中使用的固相萃取柱及凝胶树脂均可反复利用，节省成本。本发明对于荔枝资源的合理利用，以及提高荔枝产品附加值具有重大意义。

技术领域

本发明属于生物技术天然活性物质提取领域，涉及一种从荔枝果肉中提取新型α-葡萄糖苷酶抑制剂的方法。

背景技术

糖尿病(diabetes mellitus)是一种以体内高血糖为主要特征的内分泌系统疾病，分为胰岛素依赖型(Type-1)和非胰岛素依赖型(Type-2)两种类型，其中2型糖尿病占糖尿病发病率的90％左右。近年来，随着人们生活水平的提高和生活工作方式的改变，糖尿病及其并发症发生率不断上升，预计2030年全球糖尿病患者数量将达到3.66亿，亚洲是增长最快的地区之一。在中国，2012年糖尿病患者已达到9840万，预计到2030年，这一数字将达到1.3亿。因此，积极采取多种措施预防或控制糖尿病及其并发症刻不容缓。

糖尿病的治疗主要靠注射胰岛素和口服降糖药来控制高血糖症状。然而，长期注射胰岛素或口服降糖药，会产生胰岛素抵抗和一些毒副作用，因此，具有降糖活性的毒副作用小的天然产物越来越受关注。减少和延缓肠道对糖类物质的分解和吸收是降低糖尿病人体内高血糖症状的一种有效手段。α-葡萄糖苷酶是一种作用于1,4-糖苷键的葡萄糖苷酶，它可以将低聚糖水解成葡萄糖。因此，α-葡萄糖苷酶抑制剂能够抑制小肠粘膜的α-葡萄糖苷酶活性，减缓多糖和蔗糖转化为葡萄糖的速度，在不造成营养物质吸收障碍的前提下有效控制糖尿病人餐后血糖的升高。我国人口饮食中碳水化合物含量较高，α-葡萄糖苷酶抑制剂能发挥更好的降糖效果。目前临床上所用的α-葡萄糖苷酶抑制剂(阿卡波糖、伏格列波糖、米格列醇)对人体消化道均有一定的副作用如胀气、腹痛等，因此，开发天然高效、毒副作用小的α-葡萄糖苷酶抑制剂尤为重要。

荔枝(Litchi chinensis Sonn.)，无患子科荔枝属植物，原产我国南方地区，现在在亚洲、美洲、非洲和大洋洲等20多个国家均有种植，但无论从栽培面积还是产量来说，中国均为世界第一。研究荔枝果肉中物质的α-葡萄糖苷酶抑制活性，对于提高荔枝附加值和促进荔枝产业发展具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种从荔枝果肉中提取α-葡萄糖苷酶抑制剂的方法,通过以下步骤实现：

a.将荔枝果肉液氮处理后使用冷冻干燥机除去果肉水分，将冷冻干燥后的荔枝果肉用磨样机打磨成粉末状；

b.以浓度为70％的甲醇溶液超声提取30min，料液比为1:8，使用高速离心机8000r/min离心10min，取上清液，此步骤重复3次，合并上清液；

c.上清液在45℃条件下旋蒸至无甲醇气味的浓缩液为止；

d.浓缩液过固相萃取柱，用5倍柱床体积的水洗去糖，5倍柱床体积的甲醇洗脱，洗脱液45℃条件下旋蒸至粉末；

e.将得到的粉末溶于尽量少的水中，使用凝胶树脂进行梯度洗脱，凝胶树脂为Sephadex LH-20，凝胶树脂装柱体积为80ml(8×400mm)或300ml(16×400mm)，梯度洗脱液分别为水、10％甲醇溶液、20％甲醇溶液、30％甲醇溶液、40％甲醇溶液、50％甲醇溶液、60％甲醇溶液、100％甲醇溶液，梯度洗脱流速为1ml/min，梯度洗脱体积为3倍柱床体积；

f.经HPLC检测后，将所含目标产物的洗脱部分45℃条件下旋蒸，得到干燥的荔枝粗提物粉末；所述目标产物为槲皮素3-O-芸香糖-(1→2)-O-鼠李糖苷(Q-R-R)；