[发明专利]基于转录因子ZEB1在制备促进乳腺癌化疗敏感性的药物中的应用有效
| 申请号： | 201610097003.0 | 申请日： | 2016-02-23 |
| 公开（公告）号： | CN105749283B | 公开（公告）日： | 2019-04-02 |
| 发明（设计）人： | 杨爽;张翔;张震;向荣 | 申请（专利权）人： | 南开大学 |
| 主分类号： | A61K45/00 | 分类号： | A61K45/00;A61P35/00;A61K31/704;A61K31/7048 |
| 代理公司： | 天津佳盟知识产权代理有限公司 12002 | 代理人： | 侯力 |
| 地址： | 300071*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基于 转录 因子 zeb1 制备 促进 乳腺癌 化疗 敏感性 药物 中的 应用 | ||
1.Le-shZEB1在制备增加乳腺癌细胞对化疗药物敏感性的药物中的应用，其中所述Le-shZEB1的制备方法如下：
(1)在线设计并合成ZEB1 shRNA序列；
(2)将ZEB1 shRNA序列退火后连接至载体质粒pLV-H1-EF1α-puro上，双酶切鉴定目的质粒是否构建成功；其中退火条件为95℃，5分钟；双酶切中的酶为BamH1，Sac1；
(3)将上述构建成功的目的质粒，利用Letivirus系统进行病毒包装，并测定病毒滴度，构建Le-shZEB1：
a.将293T细胞以每孔1.0×106个细胞的量铺于6孔板中，待细胞密度达到90％左右时，转染细胞；
b.取一无菌的1.5ml离心管，向其中加入7.5μl Lipofectamine2000和250μl Opti-MEM，温和混匀，室温静置5min；
c.取另一无菌的1.5ml离心管，向其中加入1.5μg目的质粒，1.5μg包装质粒和250μlOpti-MEM，震荡混匀；所述包装质粒为0.5μg Gag-pol+0.5μg Rev+0.5μgVSV-G；
d.将步骤b的组分和步骤c的组分混合，温和混匀，室温静置20min；
e.移去六孔板内的旧培养基，小心加入1ml新鲜的全培养基，并将步骤d的混合液加入到六孔板中，常规培养12-16小时后换液，每孔加入3ml全培养基；
f.换液24小时后收上清并测定滴度，既为Le-shZEB1。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的药物为与化疗药物联合使用的药物。
3.Le-shATM在制备增加乳腺癌细胞对化疗药物敏感性的药物中的应用，其中所述Le-shATM的制备方法如下：
(1)在线设计并合成ATM shRNA序列；
(2)将ATM shRNA序列退火后连接至载体质粒pLV-H1-EF1α-puro上，双酶切鉴定目的质粒是否构建成功；其中退火条件为95℃，5分钟；双酶切中的酶为BamH1，Sac1；
(3)将上述构建成功的目的质粒，利用Letivirus系统进行病毒包装，并测定病毒滴度，构建Le-shATM：
a.将293T细胞以每孔1.0×106个细胞的量铺于6孔板中，待细胞密度达到90％左右时，转染细胞；
b.取一无菌的1.5ml离心管，向其中加入7.5μl Lipofectamine2000和250μl Opti-MEM，温和混匀，室温静置5min；
c.取另一无菌的1.5ml离心管，向其中加入1.5μg目的质粒，1.5μg包装质粒和250μlOpti-MEM，震荡混匀；所述包装质粒为0.5μg Gag-pol+0.5μg Rev+0.5μgVSV-G；
d.将步骤b的组分和步骤c的组分混合，温和混匀，室温静置20min；
e.移去六孔板内的旧培养基，小心加入1ml新鲜的全培养基，并将步骤d的混合液加入到六孔板中，常规培养12-16小时后换液，每孔加入3ml全培养基；
f.换液24小时后收上清并测定滴度，既为Le-shATM。
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