[发明专利]一种杆菌肽及其锌盐的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于工业微生物技术领域，具体涉及一种杆菌肽及其锌盐杆菌肽锌的制备 方法。

背景技术

杆菌肽（Bacitracin）最初是Johnson从患者伤口污染物中分离出的一株枯草芽孢 杆菌，经培养得到的多肽类抗生素。可由枯草芽孢杆菌（bacillussabtilis）和地衣芽孢杆 菌（Bacilluslicheniformis）产生。由于其对革兰氏阳性菌有较强的抗菌作用，与金属离 子络合后稳定性增强，抗菌活性更高。该药局部应用刺激小，过敏反应少见，耐酶，细菌对其 产生耐药性又较慢，获得耐药性菌株极为罕见。而且其活性不受脓液、痰液、血液、渗出液和 坏死组织的影响，故迄今常作为局部抗感染药而广泛使用。

杆菌肽是由12个氨基酸组成的多肽类抗生素，其中含有一个7个氨基酸构成的环 肽。杆菌肽中含有杆菌肽A、B、C、D、E、F等多个组分，其中杆菌肽Ａ生物活性最强。

美国药典对药用杆菌肽各组分含量有严格的规定；其中杆菌肽A（HPLC相对保留时 间为1.0RT）含量不小于40%，杆菌肽B1、B2、B3、A（0.7RT，0.7RT，0.8RT，1.0RT）的峰面积之和 不小于70%，杆菌肽B1（0.7RT）之前的峰面积之和不得大于20%，杆菌肽F（2.4RT）的峰面积不 大于6%。

杆菌肽为多组分产品，美国药典对各组分含量有严格的规定。国内产品由于达不 到国外药典标准多为兽用制品，本产品的提取技术路线国内研究很少，郭淑琴、魏景新发表 的《树脂吸附法提取杆菌肽的研究》（沈阳化工1985.03.02），使用离子交换法提纯杆菌肽， 可得到纯度54U/mg的杆菌肽，天津大学化工学院研究生刘咏的论文《抗生素杆菌肽锌脱色 提纯工艺研究》利用膜分离技术对杆菌肽锌盐进行纯化精制，最终可使产品效价提高到 50U/mg以上。这两种方法所获得产品的生物活性均不是很高。

国外对该产品纯化工艺研究较多，US2,457,887以活性氧化铝或活性炭吸附杆菌 肽进行提取，由于无机介质对活性物质的吸附量很低，该法不适合工业化。US2,498,165和 US2,609,324使用大量有机溶剂多级萃取，有些溶剂毒性较大，该法收率较低，纯化效果也 不明显。US2,739,063以沉淀剂将杆菌肽沉淀到无机载体上，该法收率较低，产品稳定性差。 GB782,999采用羧酸型阳离子交换树脂提取，解析液经溶媒萃取提纯后制备杆菌肽锌，产品 效价可到55U/mg，总收率35%左右，无论产品效价还是总收率均处于较低水平。US2,915, 432使用低交联度羧酸型阳离子交换树脂提取，辅以无机盐沉淀法纯化制备出高效价杆菌 肽锌总收率51%，产品效价可达76U/mg。该法需要使用大量无机盐，回收困难,该法总收率也 偏低。

发明内容

本发明的目的是提供一种操作简便、高效、适合工业化生产的高活性杆菌肽及其 盐杆菌肽锌的制备方法。

本发明所提供的杆菌肽的制备方法，包括以下步骤：

1）杆菌肽发酵液以水稀释、加入酸化剂调节pH值为3.0-4.0，过滤，得到杆菌肽滤液。

2）将滤液调节PH为6.0-9.0，通过大孔强酸型阳离子交换树脂吸附，再以碱性解吸 剂解吸，得杆菌肽解吸液。

3）解吸液通过大孔阳离子交换树脂脱盐，再通过脱色树脂进行脱色，得到脱色液。

4）将脱色液以有机溶剂萃取，得萃取液。

5）向萃取液中加入沉淀剂沉淀，经过滤、干燥，得到杆菌肽。

其中步骤1）所述酸化剂为盐酸、草酸、醋酸、硫酸中任意一种。其中以草酸和醋酸 更优；调节pH值为3.0-4.0之间，以3.0-3.5为更优。过滤之前加入助滤剂，常用的助滤剂有 硅藻土、珍珠岩等，有助于过滤操作。

其中步骤2）所述大孔强酸型阳离子交换树脂为D001、HD8树脂中的任意一种。所用 解吸剂为弱碱性水溶液，该弱碱性水溶液以2%-4%的氨水为优。

其中步骤3）所述阳离子交换树脂为001X2、001X7、001X8中的一种。

其中步骤3）所述脱色树脂为D315、D304、D301中的任意一种。

其中步骤4）中所述有机溶剂为正丁醇、异丁醇、乙酸丁酯中的一种，萃取pH为6.0- 8.0。优选萃取pH为6.0-6.5。

其中步骤5）所述沉淀剂为丙酮，用量为萃取液体积的5-8倍。