[发明专利]诃子素分子印迹聚合新材料的制备及用途

说明书

技术领域：

本发明专利涉及的是一种医药化学工程技术领域的方法，具体涉及诃子素分子印迹材料的制备及利用该材料从中药粗提物中分离、纯化诃子素及其结构类似物的方法。

背景技术：

诃子为使君子科植物诃子(TerminaliachebulaRetz.)的干燥成熟果实，被称为藏药之王，在《金匮要略》中称为诃黎勒，在《千金方》中称为诃黎，在《传信方》中称为随风子，在各民族医药，尤其在藏药和蒙药中应用十分广泛。诃子(别名藏青果、诃黎勒；蒙药名为“阿如拉”)，是藏药三果之一，始载于公元8世纪初叶的藏医药书《月王药诊》。在藏药学经典著作《晶珠本草》里，诃子被称为“藏药之王”，“益于百病，升体温，助消化，用于隆、赤巴、培根、血病及四种病的合并症”。蒙医药认为诃子是药物之帝，医治百病，诃子在民间可单用，藏医和蒙医多以方剂的形式用药，如二十五味珊瑚丸、白脉散、人参诃子散、诃子丸等，藏医用诃子配伍丁香、肉豆蔻、羊骨头治心悸、怔仲、胸闷不舒、癫狂病。足见诃子在蒙医药临床中具有重要的地位和作用。同时诃子也在印度、泰国等亚非国家中广泛应用。现代医学研究表明诃子中含有神经保护的活性成分诃子素是诃子中的主要活性成分之一，属于特征成分之一，结构新颖，具有神经保护、心脑血管保护、抗氧化等活性，应用前景好。目前诃子素的提取分离工艺复杂、成本昂贵、环境不友好，所以寻找新方法从中药粗提物中快速分离纯化诃子素及其结构类似物有重要意义。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种制备诃子素分子印迹材料的技术，并提供一种利用该材料作为固相萃取固定相从中药粗提物中分离、富集、纯化诃子素的方法。本发明通过以下的技术方案实现的，具体包括步骤如下：

用紫外光谱法对功能单体进行了选择，采用沉淀聚合法先将模板分子诃子素，功能单体1-乙烯基咪唑，交联剂乙二醇二甲基丙烯酸酯以1∶6∶12的摩尔比例加入盛有150mL甲醇-水溶液(9∶1，V/V)的圆底烧瓶中，超声溶解；加入引发剂偶氮二异丁腈10mg，溶解后，通氮气15min，密封，60℃水浴聚合24h；反应合成的聚合物经干燥后，用甲醇-冰醋酸(9∶1，V/V)以索氏提取的方式进行洗脱，洗去模板分子以及未聚合的功能单体和交联剂，直至紫外检测无以上物质的紫外吸收；再用甲醇洗去残留的冰醋酸，即得到诃子素的分子印迹聚合物MIPs，经60℃真空干燥后，备用。空白分子印迹聚合物NIPs的合成除了不加入模板分子诃子素外，其余步骤等同于MIPs的制备。

取适量诃子素MIPs于扫描电子显微镜下观测拍照，进行形貌表征，如图1。从图中可以看出采用沉淀聚合法可以合成表面较光滑，大小较均匀的聚合物微球。

具体实施方式：

实施例

将合成的诃子素MIPs与NIPs精密称取30.0mg各6份，分别置于10mL容量瓶中，分别依次加入不同浓度(10-60μg/mL)诃子素-乙腈水溶液3mL，密闭，于恒温震荡器上震荡吸附12h，静置，吸取上清液，用紫外分光光度计检测溶液中模板分子诃子素的浓度变化。根据吸附前后溶液中模板分子诃子素的浓度变化计算分子印迹聚合物的吸附量，并进行Scatchard分析，结果如图2。从图2可以看出诃子素MIPs的吸附能力明显高于其相应的NIPs，说明了MIPs对目标分子具有选择性的吸附能力，而NIPs则没有。由公式计算可得诃子素MIPs和NIPs的最大表观结合位点数Q_max和聚合物-目标分子复合物的解离常数K_d分别为：Kd＝0.024g/L，Qmax＝3.02μg/mg和Kd＝0.013g/L，Qmax＝0.37μg/mg，可见诃子素MIPs对目标分子的吸附性能明显高于NIPs。

将合成的分子印迹聚合物MIPs取200mg以干法装柱法填充于固相萃取空柱中，用甲醇溶液清洗并平衡填好的固相萃取柱和相同规格的C₁₈柱，吹干，精密量取2mg/ml复方白脉散提取液1mL，分别上MIPs柱和C₁₈柱，往柱中加压，控制流速为0.5mL·min^-1，待吸附完全之后，用氮气吹干，再用10mL甲醇淋洗柱子并收集洗脱液。洗脱液过0.22μm滤膜后，液相检测。二者对目标成分诃子素的富集因子分别为87.7％和10.3％，可以看出MIPs的选择吸附性明显高于C₁₈，作为固相萃取柱的填充相具有很好的应用前景。

附图说明：

图1：诃子素分子印迹材料(MIPs)表观形态的电镜扫描图

图2：诃子素分子印迹材料(MIPs)和非分子印迹材料(NIPs)对诃子素的等温吸附曲线。