[发明专利]用于检测亚洲型寨卡病毒的荧光RT-PCR引物和荧光探针、试剂盒及检测方法

说明书

本发明提供了一种用于检测亚洲型寨卡病毒的荧光RT‑PCR引物和荧光探针、试剂盒及检测方法，所述用于检测亚洲型寨卡病毒的荧光RT‑PCR引物包括正向引物和反向引物，所述正向引物包括如SEQ ID NO：1所示的序列，所述反向引物包括如SEQ ID NO：2所示的序列；所述荧光探针为寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针包括如SEQ ID NO：3所示的序列。采用本发明的技术方案，通过引入特异性荧光探针和荧光信号的动态监测使PCR产物的扩增及分析的全过程在单管内封闭完成，具有实时、准确、快速、简便的特点，无需后续处理，避免污染，为降低病死率以及控制疫情争取时间。

技术领域

本发明属于体外核酸检测技术领域，本发明提供了一种用于检测亚洲型寨卡病毒的荧光RT-PCR引物和荧光探针、试剂盒及检测方法。

背景技术

寨卡病毒（Zika virus）是一种蚊媒病毒，于1947年首次在乌干达恒河猴中发现。属黄病毒科黄病毒属，为单股正链RNA病毒，直径40-70nm，有包膜，包含10794个核苷酸，编码3419个氨基酸。寨卡病毒与同为黄病毒属的登革病毒、黄热病毒及西尼罗病毒等存在较强的血清学交叉反应。寨卡病毒可引起一种自限性急性传染病，称为寨卡病毒病，临床特征主要为发热、皮疹、关节痛或结膜炎，极少引起死亡。世界卫生组织（WHO）认为，新生儿小头畸形、格林-巴利综合征（吉兰-巴雷综合征）可能与寨卡病毒感染有关。

寨卡病毒病主要在全球热带及亚热带地区流行。1952年，在乌干达和坦桑尼亚的人体中分离到该病毒。此后,多个国家有散发病例报道。2007年,首次在西太平洋国家密克罗尼西亚的雅普岛发生寨卡病毒疫情暴发。截至2016年1月，至少在非洲、亚洲、美洲的45个国家有寨卡病毒传播的证据，以巴西疫情最为严重。根据基因型别分为非洲型和亚洲型，2016年1月美洲流行的为亚洲型。

我国南方部分地区存在可传播寨卡病毒的媒介伊蚊，近年来与之传播方式相似的登革热输入性疫情持续增多，并在南方部分省份引起了较大规模的暴发疫情。随着与相关国家或地区人员往来的日益密切，我国存在寨卡病毒输入风险。特别是我国南方地区夏秋季节伊蚊密度较高，一旦有病例输入，不排除在局部地区发生本地传播扩散的可能。因此，急需建立一种快速、高效、准确的检测方法和检测试剂盒。

发明内容

针对以上技术问题，本发明提供了一种用于检测亚洲型寨卡病毒的荧光RT-PCR引物和荧光探针、试剂盒及检测方法，可以快速、高效、定性的检测样本中的亚洲型寨卡病毒。

对此，本发明的技术方案为：

一种用于检测亚洲型寨卡病毒的荧光RT-PCR引物和荧光探针，所述用于检测亚洲型寨卡病毒的荧光RT-PCR引物包括正向引物和反向引物，所述正向引物包括如SEQ ID NO：1所示的序列，所述反向引物包括如SEQ ID NO：2所示的序列，所述荧光探针为寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针包括如SEQ ID NO：3所示的序列。

正向引物：5'-AAAGGGAGCCTGGTGACATG-3'

反向引物：5'-CTGGGAGCCATGAACTGACA-3'

寡核苷酸探针：5'-AAGAGCATCCAGCCAGAGAATCTGG-3'。

作为本发明的进一步改进，所述正向引物还包括SEQ ID NO：1所示的序列的衍生序列；所述反向引物还包括SEQ ID NO：2所示的序列的衍生序列；所述寡核苷酸探针还包括如SEQ ID NO：3所示的序列的衍生序列；其中，所述衍生序列包括引物序列的互补链序列，或向5'端和3'端方向延伸一至十个以内的碱基或删减一至十个以内的碱基得到的序列。

作为本发明的进一步改进，所述寡核苷酸探针的3’端标记有第一荧光淬灭基团，5’端标记有第一荧光报告基团。