[发明专利]一种无粘孢子虫病害的异育银鲫苗种培育方法

说明书

技术领域

本发明属于水产养殖技术领域，具体设计一种无粘孢子虫病害的异育银鲫苗种培育方 法。

背景技术

异育银鲫是中国科学院水生生物研究所的鱼类育种专家于1976～1981年研制成功的一种 鲫鱼养殖新对象，它是利用天然雌核发育的方正银鲫为母本，以兴国红鲤为父本，经人工授 精繁育的子代。该鱼具有良好的杂种优势，增产效果明显，且肉质细嫩，营养丰富，离水存 活时间长，可在低温、无水条件下中短途运输活鱼。异育银鲫对食物没有偏爱，只要适口， 各种食物均可利用。异育银鲫制种简便，子代形状稳定；异育银鲫有很强的抗逆性，生活 适应能力很强，它既能在湖泊、水库等大面积水体中放养，也可在河沟、池塘中养殖，单 养、混养均可。异育银鲫受精卵孵化率可达80％以上，夏花成活率也可达90％以上；按常 规运输法，异育银鲫的运输成活率可达90％以上。异育银鲫生长快，饲养周期短，生长速度 较父本快34.7％，比普通鲫鱼快2-3倍。一般当年苗种可长到200-250克，最大个体重可达 400余克。池塘混养，每亩放养80-100尾异育银鲫，在不增加饲料的条件下，当年每亩可增 产优质成鱼25公斤左右。

粘孢子虫病是由于粘孢子虫(Myxosporeans)引起的一类寄生性病害，近年来已发展成 危害严重的水产动物病害之一。粘孢子虫属粘体动物门(Myxozoa)，是一类产孢子的后生动 物寄生虫而非原生动物，迄今国内外已报到2500余种，寄主范围涉及从无脊椎动物到脊椎 动物所有门动物的广泛宿主，但水产动物，尤其是鱼类是其最主要寄主。随着世界水产养殖 业的快速发展，养殖环境、模式等的改变，新的养殖品种的引入等因素，粘孢子虫已成为水 产养殖业可持续发展的主要限制因子之一。

在养殖异育银鲫的过程中，粘孢子虫是其主要病害之一，不少粘孢子虫作为机会性病原 体都有可能造成严重的粘孢子虫病，给异育银鲫的生产造成损失。遗憾的是在近200年的粘 孢子虫即其病害的研究历史中，有效药物的缺乏(迄今尚未有一种商品化的粘孢子虫病治疗 或预防药物)致使人们对粘孢子虫病捉襟见肘，甚至到了谈粘孢子虫色变的地步。学界普遍 认为一旦粘孢子虫侵入鱼体进入孢子发育期或发育成成熟粘孢子，由于粘孢子虫包囊壁的致 密结构及粘孢子的坚硬几丁质壳等原因，先已尝试的药物大都因不可能渗透之原因而效果甚 微，如辛酸(Caprylicacid)、盐霉素(Salinomycin)、托曲珠利(Toltrazuril)、盐酸氨丙啉 (Amprolium)等。烟曲霉素(Fumagillin)及其相似物(TNP-470)一度被认为对粘孢子虫 病具有一定功效，但由于其潜在的致癌性及其抑制后的复发性而限制了其应用。我们前期的 研究表明，异育银鲫粘孢子虫病(尤其是苏北主产区)爆发与携带病原的苗种缺乏严格的检 验检疫显著相关，因此，随着粘孢子虫病危害的加剧，开发用于该粘孢子虫检测的快速灵敏 方法、培育无粘孢子虫感染的苗种对于有效防控该病及其阻断其大面积传播十分重要。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于检测粘孢子虫的特异性引物。

本发明的另一目的在于提供一种用于检测粘孢子虫的试剂盒。

本发明的又一目的在于提供一种鱼苗及其开口饵料中粘孢子虫的检测方法。

本发明的又一目的在于提供一种无粘孢子虫病病害的异育银鲫苗种培育方法。

本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

一种用于检测粘孢子虫的特异性引物，该特异性引物MyxoSpecF/MyxospecR的序列 为：MyxoSpecF：5’-TTCTGCCCTATCAACTWGTTG-3’；

MyxospecR：5’-GGTTTCNCDGRGGGMCCAAC-3’。

上述的特异性引物在检测鱼苗及其开口饵料中的粘孢子虫中的应用。

上述的特异性引物在制备用于检测粘孢子虫的试剂盒中的应用。

一种用于检测粘孢子虫的试剂盒，其该试剂盒中包含有上述的特异性引物。

上述的用于检测粘孢子虫的试剂盒，其在于该试剂盒中还包括PCR技术常用的试剂。

一种鱼苗及其开口饵料中粘孢子虫的检测方法，包括以下步骤：

(1)提取育苗血液或其开口饵料样品中的基因组DNA；

(2)以所提取的基因组DNA为模板，采用上述的特异性引物进行PCR扩增；