[发明专利]S-腺苷甲硫氨酸合成酶制剂、及其制备方法和用途

说明书

本申请涉及S‑腺苷甲硫氨酸合成酶制剂、及其制备方法和用途。本公开的制备方法利用基因工程技术将S‑腺苷甲硫氨酸合成酶基因构建至原核表达载体中，并转化大肠杆菌构建重组宿主细胞；通过补料分批发酵得到高产量的菌体；之后通过亲和层析技术，对S‑腺苷甲硫氨酸合成酶纯化，所得蛋白的色谱纯度在90％以上。本申请还涉及S‑腺苷甲硫氨酸合成酶在制备同型半胱氨酸诊断试剂中的用途。

技术领域

本公开涉及生物化学领域；具体而言涉及S-腺苷甲硫氨酸合成酶酶制剂及其生产方法和用途。

背景技术

S-腺苷甲硫氨酸合成酶(以下简称MAT)(EC 2.5.1.6)是生物体内一种非常重要的酶。在有Mg²⁺和K⁺存在的情况下，它可以催化L-Met与ATP反应，生成S-腺苷甲硫氨酸(SAM)。SAM是生物体内重要的中间代谢产物，参与体内多种生化反应。S-腺苷甲硫氨酸合成酶是一种重要的原料酶。

现有的S-腺苷甲硫氨酸合成酶生产方法主要采用酵母系统(参见1-4)，包括毕赤酵母和酿酒酵母。这种方法的缺点主要是生产过程相对原核表达体系来说比较复杂，产量较低，同时成本高。这最终导致MAT的生产成本提高。因此，本领域当中仍然需要一种成本更有效的方法来生产高纯度的MAT。

目前的临床检验中，对同型半胱氨酸(HCY)的检测以酶循环法为主导地位。现有技术的循环酶法检测试剂盒有两种：一种为甲基转移酶和水解酶的循环酶法；另一种为胱硫醚循环酶法。循环酶法简便易行，已经在临床广泛采纳。

现有技术中，采用酶循环法测定HCY的检测试剂，包括但不限于如下文献中所报道的：CN104140996A；CN104630324A；CN104198726A；张传宝等人，对循环酶法同型半胱氨酸测定试剂盒的评价，中华检验医学杂志，2006；叶余辉，循环酶法测定血清同型半胱氨酸试剂盒的评价，中国医药指南，2013；王兴宁等人，循环酶法测定同型半胱氨酸试剂盒评价，标记免疫分析与临床，2014。

然而，胱硫醚循环酶法缺陷在于易受人体内源的胱硫醚干扰。甲基转移酶和水解酶的循环酶法不受人体内源胱硫醚的干扰，但是依然存在稳定性差等缺点。因此，本领域依然需要提供一种更加改进的循环酶法检测试剂。

发明内容

根据本公开的一方面，提供一种酶制剂，其含有按质量计不低于90％的S-腺苷甲硫氨酸合成酶；例如纯度不低于91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％的S-腺苷甲硫氨酸合成酶。

在本申请的上下文中，纯度表征了物质含杂质的程度，杂质越少，纯度越高。对于蛋白质纯度的测定允许采用本领域技术人员公知的任何方法(包括现在的以及未来的测定方法)，包括但不限于电泳法、色谱法。在一些实施方式中，本申请中MAT酶制剂的纯度是通过电泳法所确定的纯度。具体而言，在电泳法中，将样本上样于凝胶中进行电泳，然后对凝胶进行染色，将代表着MAT的条带的染色强度和全部条带的染色强度进行比较，通过所获得的比例确定MAT在酶制剂中的纯度。

在另一些实施方式中，本申请MAT酶制剂的纯度是通过色谱法所确定的纯度。例如，将样本上样于色谱柱上，当组分流出色谱柱时通过紫外检测信号，将代表着MAT的色谱峰面积和全部色谱峰面积进行比较，通过所获得的比例确定MAT在酶制剂中的含量。

在一些实施方式中，所述S-腺苷甲硫氨酸合成酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。