[发明专利]一种大豆PUB类E3泛素连接酶GmPUB8及其编码基因与应用

说明书

本发明公开了一种大豆PUB类E3泛素连接酶GmPUB8及其编码基因与应用。该大豆PUB类E3泛素连接酶GmPUB8，是具有序列表中的SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列的蛋白质。其编码基因的开放阅读框具有SEQ ID NO.1所示的DNA序列。拟南芥遗传转化表明GmPUB8在不同光周期下调控植物的开花时间，可应用于大豆分子育种。

技术领域

本发明涉及植物基因工程领域，具体涉及一种大豆PUB类E3泛素连接酶 GmPUB8及其编码基因与应用。

背景技术

开花是植物由营养生长向生殖生长转变的关键过程，植物的开花时间直接控制植物营养生长期和生育期的长短。植物经过长期的演化已经进化出了精确调节开花时间的复杂网络，其中，泛素/26S蛋白酶体途径和类泛素化作为广泛存在的蛋白质翻译后修饰形式，在植物开花时间调控过程中发挥了重要作用。泛素/26S蛋白酶体途径和类泛素化还可调节蛋白质功能，参与真核生物体内的细胞周期调控、基因表达调控及生长发育各个过程。

泛素/26S蛋白酶体途径主要由泛素、泛素激活酶E1、泛素结合酶E2、泛素连接酶E3、去泛素化酶和26S蛋白酶体组成。目前，PUB类E3泛素连接酶基因先后在拟南芥、水稻等植物中克隆出来。拟南芥中的PUB类E3泛素连接酶基因在抗高温、黑暗及干旱胁迫中发挥着重要功能。

发明内容

本发明的目的是提供一种大豆PUB类E3泛素连接酶GmPUB8。

本发明的另一目的是提供该大豆E3泛素连接酶GmPUB8的编码基因。

本发明的又一目的是提供该大豆E3泛素连接酶的应用。

本发明的目的通过如下技术方案实现：

一种大豆PUB类E3泛素连接酶GmPUB8，具有SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。

本发明所述的大豆PUB类E3泛素连接酶的编码基因GmPUB8，其最大开放阅读框序列如SEQ ID NO.1所示，含有1257bp，编码SEQ ID NO.2所示的 418个氨基酸残基。

含有本发明GmPUB8基因SEQ ID NO.1的表达载体。

所述的表达载体优选将SEQ ID NO.1所示的大豆PUB类E3泛素连接酶 GmPUB8的编码基因利用gateway技术插入植物表达载体pMDC83得到的植物过量表达载体pMDC83-GmPUB8。

使用GmPUB8构建植物表达载体时，在其转录起始核苷酸前可加上任何一种增强型启动子。为了便于对转基因植物细胞或植物进行鉴定及筛选，可对所用植物表达载体进行加工，如加入可在植物中表达的选择性标记基因(GUS基因、萤光素酶基因等)或抗生素标记物(庆大霉素标记物、卡那霉素标记物、潮霉素标记物等)的抗性基因。

含有所述大豆PUB类E3泛素连接酶GmPUB8编码基因的工程菌。

所述的工程菌优选将所述的大豆PUB类E3泛素连接酶GmPUB8编码基因转入根癌农杆菌EHA105所得。

扩增所述大豆PUB类E3泛素连接酶GmPUB8编码基因的引物，正向引物序列为SEQID NO.3，反向引物序列为SEQ ID NO.4。

扩增所述大豆PUB类E3泛素连接酶GmPUB8编码基因的实时荧光定量 RT-PCR引物，正向引物序列为SEQ ID NO.5，反向引物序列为SEQ ID NO.6。

所述的大豆PUB类E3泛素连接酶GmPUB8在不同光周期下调控开花时间方面的应用。所述的大豆PUB类E3泛素连接酶GmPUB8的编码基因在不同光周期下调控开花时间方面的应用。

有益效果：