[发明专利]琼脂包埋果蝇的透射电镜制样方法

权利要求书

1.琼脂包埋果蝇的透射电镜制样方法，是将果蝇用琼脂溶液预包埋后制备 透射电镜样本以实现快速定位果蝇背部肌肉的方法，其特征在于：操作步骤如 下：

(1)果蝇经乙醚熏晕后取出，用双面刀片快速将头切下(勿人为撕断下 头部)，立即将果蝇丢入体积分数为3％的戊二醛固定液中，抽真空使其沉入管 底，在4℃条件下固定2小时；

(2)提前配好质量分数为2％的琼脂粉溶液，放入4℃冰箱保存，用时微 波炉加热溶解，温度降至不烫手时待用，取出一个载玻片，用镊子轻轻夹出步 骤(1)固定液中的果蝇，放在载玻片上，调整方向为侧躺状态，在果蝇上滴 两三滴琼脂溶液，待琼脂凝固后用双面刀片修整，根据果蝇身体将琼脂块修成 长方体，长方体大小为果蝇体积的三倍，果蝇背部贴在长方体最小面积的一个 面上，且与之平行，果蝇背部与长方体琼脂块最小面的距离为0～5毫米；

(3)将步骤(2)琼脂包埋好的果蝇依次经过0.1mol/L磷酸缓冲液清洗 3次，每次清洗10分钟；用质量分数为1％的锇酸固定2小时；用体积分数为 50％、70％、90％的乙醇梯度脱水，各1次，时间各为10分钟；用体积分数90％ 的乙醇与体积分数90％的丙酮体积比1:1脱水10分钟；用纯丙酮脱水3次， 时间各为10分钟；用环氧树脂618包埋剂与纯丙酮体积比1:1渗透1小时， 用环氧树脂618包埋剂与纯丙酮体积比3:1渗透3小时；用纯包埋剂渗透过夜； 纯包埋剂包埋，包埋时，将果蝇背部所平行的一面顶在包埋板模块的顶端，即 果蝇背部与包埋板模块的顶端面平行；在聚合箱内36℃条件下渗透24小时， 45℃条件下聚合12小时，65℃条件下聚合48小时得到琼脂包埋果蝇的透射电 镜包埋块；

所述包埋剂：

环氧树脂618包埋剂配方：

聚合条件：在36℃条件下渗透12～24小时，在45℃条件下聚合12～48 小时，在65℃条件下聚合24～48小时；

Epon-812包埋剂配方：

聚合条件：在60℃条件下聚合24小时；

Spurr树脂包埋剂配方：

聚合条件：在70℃条件下聚合12小时；

(4)从步骤(3)得到琼脂包埋果蝇的透射电镜包埋块，我们发现果蝇的 位置跟树脂包埋时摆放的位置一致，即背部紧贴在包埋块顶端或与顶端平行。 切片机切出2μm厚度的半薄切片，在洁净的载玻片上滴一滴双蒸水，用镊子 小心地将半薄切片夹到水滴上，置于电加热板上加热烤干，再滴上一滴质量分 数为1％的甲苯胺蓝染液，染色30秒，双蒸水冲洗，电加热板上烤干，显微镜 下观察，获得果蝇背部肌肉的纵向切面，完成定位，为该纵向肌肉位置的超薄 切片做好准备。