[发明专利]检测AGP1、SERPINA3和CDH1含量的系统在筛查活动性结核病患者中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域中检测AGP1、SERPINA3和CDH1含量的系统在筛查活动性结核病患者中的应用。

背景技术

结核病(Tuberculosis,TB)是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis，MTB)感染引发的慢性传染性疾病，严重威胁人类健康。全国第五次结核病流行病学调查显示我国现有超过500万名成人活动性肺结核患者。成人感染结核分枝杆菌后，部分呈现带菌生存状态，并不会发展为结核病，称为结核潜伏感染者(Latent tuberculosis infection,LTBI)；约5-10％的潜伏感染者会继续发展为活动性结核病(Active tuberculosis,ATB)。活动性肺结核是指痰涂片阳性者,证明有结核分枝杆菌排出,病灶属于活动期,胸片上常有斑片状阴影或是结核空洞,或者播散病灶,说明结核分枝杆菌繁殖活跃,毒力强。国内各地区流行病学调查结果显示，基于γ-干扰素释放试验(IGRA)得出的结核分枝杆菌感染率大约在20％-30％之间，即全国约有3-4亿人为结核分枝杆菌感染者，数目庞大的无临床症状的结核潜伏感染者是活动性结核病的重要来源。此外，由于结核潜伏感染的预防性治疗方案与活动性结核病的抗痨治疗方案显著不同。因此，如何实现结核分枝杆菌潜伏感染者与活动性结核病患者的早期鉴别诊断至关重要。

常用的结核分枝杆菌感染诊断方法包括传统的结核菌素实验(TST)以及γ-干扰素释放试验(IGRAs)，TST方法容易受到卡介苗接种和非结核分枝杆菌的干扰，结核分枝杆菌感染诊断不够明确，更无法区别结核潜伏感染和活动性结核病。新近推行的IGRAs方法，虽然能够检测结核分枝杆菌感染，但无法区分结核杆菌潜伏感染和活动性结核病。目前活动性结核病的诊断金标准仍然是经典的痰涂片染色显微镜下查找抗酸杆菌以及结核杆菌培养法，已有近百年的历史。这两种检测方法的敏感性均不高，痰涂片染色法的敏感性约30％，结核杆菌培养法的敏感性约60％。痰涂片染色法虽然可以当天出结果，但不能区分结核杆菌和非结核分枝杆菌，也不能区分MTB是活菌还是死菌。结核杆菌培养法的敏感性虽高一些，但耗时较长，即使快速培养也需要1个月的时间才能得到结果。另外，对于临床上大量的肺外结核和涂阴、菌阴的活动性结核病患者，金标准检测方法的应用受到限制，加剧了诊断的困难，给及时治疗带来了阻力。近年来虽然陆续出现了一些先进的基于核酸扩增的分子生物学检测技术(如XpertMTB/RIF assay)，但由于受到仪器设备和诊断费用的限制，以及假阳性率偏高等问题，还无法全面推广。因此，现行的结核病诊断方法或辅助诊断手段都无法实现快速有效的鉴别诊断结核分枝杆菌潜伏感染和活动性结核病，使得临床上面临严重的治疗延误以及过度治疗等问题。基于此，寻找新的活动性结核病特异标志物，鉴别诊断结核分枝杆菌潜伏感染和活动性结核病，已经成为活动性结核病临床诊断中一项亟待解决的难题。

血浆蛋白质组组成成分、表达水平和疾病有密切联系，用蛋白质组学方法分析动态变化的蛋白质组，对鉴别诊断活动性结核病和结核潜伏感染有重要意义。Labelfree 2D-LC-MSMS是将非同位素标记技术、二维液相色谱串联质谱技术相联用，信号离子表现为不同质荷比的峰，根据波峰的高度及面积可得到准确的蛋白质定量信息，非常适合对多样本的平行分析。

Alpha-1-acid glycoprotein 1(AGP1)，α1酸性糖蛋白(α1AG)，早期称乳清类粘蛋白，由肝脏合成，癌细胞也可合成。AGP1的肽链结构与Ig轻链可变区及部分重链区、结合珠蛋白α链结构类似，说明AGP1从Ig家系演变而来。体液中AGP1含量的变化可按下列病种排列依次升高，即漏出液、炎症渗出液、恶性肿瘤渗出液。Alpha-1-antichymotrypsin(SERPINA3)，α-抗胰凝乳蛋白，虽然该蛋白的详细生理功能不是很清楚，但是可以抑制中性粒细胞和肥大细胞类糜蛋白酶，两者都可以激活使血管紧张素。E-cadherin(CDH1)，上皮细胞钙粘蛋白，上皮细胞钙粘蛋白是一种钙离子依赖的细胞粘附分子,存在于上皮细胞,参与细胞的粘附和信息传导过程,并与肿瘤的分级和预后均有一定的相关关系。上皮细胞钙粘蛋白的细胞外区为信号肽结构,具有钙离子结合点,能够与钙离子特异性结合,跨膜区起着膜固定作用,是细胞与细胞间紧密连接的关键,当其表达下调或功能障碍时,将使同种细胞失去粘附,意味着肿瘤细胞容易从原发病灶脱落分离。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何筛查活动性结核病患者。