[发明专利]一种鉴定鸟类性别的LAMP试剂盒及其专用引物

说明书

本发明公开了一种鉴定鸟类性别的LAMP试剂盒及其专用引物。本发明所提供的鉴定鸟类性别的LAMP试剂盒的专用引物由引物FIP、引物BIP、引物LF、引物LB、引物F3和引物B3组成，各条引物均为单链DNA分子，核苷酸序列依次为序列表中的序列1、序列2、序列3、序列4、序列5和序列6。实验证明，本发明提供的一种鉴定鸟类性别的LAMP试剂盒及其专用引物能准确的鉴定鸟类性别，且具有耗时短、操作简单和灵敏度高的优点，具有重大的应用价值。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种鉴定鸟类性别的LAMP试剂盒及其专用引物。

背景技术

全世界的鸟类中有50％是单态性鸟，其性别无论是幼鸟还是成鸟都很难从外观及其他行为上区分，这给配对造成了相当大的困难，而且雌雄对于环境、营养条件的要求和反应也不同，这也对鸟类性别鉴定提出了新的要求。同时，鸟类性别的早期鉴定和控制对于鸟类配对、育种和遗传疾病的防治具有重要的意义，对由于环境污染、植被破坏及非法捕猎等种种原因正逐步濒临灭绝的珍稀鸟类尤有意义，因此必须安全准确地鉴定出鸟类性别。

性别决定是一个多基因级联调控的复杂过程，性别决定机制、性别控制和性别早期鉴定研究一直是人们很感兴趣的课题，而鸟类性别决定的研究由于鸟禽养殖业的经济价值而格外受到重视。自本世纪以来，对鸟类性别决定机制的研究已从形态学水平提高到分子水平。近年来，在鸟类的Z染色体和W染色体上都克隆到了与性别决定相关的基因(雄鸟的染色体是ZZ型，雌鸟的染色体是ZW型)，性别鉴定的方法也随着性别决定机制研究的深入得到同步发展，从个体水平、细胞水平发展到分子水平。现代分子新技术的进步，尤其是针对性染色体特异基因序列的聚合酶链式反应(PCR)方法的使用提供了对鸟类实施安全、快速、准确、高效性别鉴定的新方法。

近年来开发的环介导等温扩增(loop mediated isothermal amplification，LAMP)是一种新的核酸扩增技术，该技术依赖于能够识别靶序列上特异区域的引物和具有链置换特性的DNA聚合酶(Bst DNA polymerase)，在等温条件下高效扩增靶基因，灵敏度和特异性高，该方法已广泛应用于病毒、类病毒、细菌及真菌的检测，而迄今尚未应用该技术鉴定鸟类性别的报道。

发明内容

本发明所要解决技术问题是如何鉴定鸟类性别。

本发明首先提供了一种成套引物，由引物FIP、引物BIP、引物LF、引物LB、引物F3和引物B3组成。

所述引物FIP为如下(a1)或(a2)：

(a1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；

(a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子。

所述引物BIP为如下(b1)或(b2)：

(b1)序列表的序列2所示的单链DNA分子；

(b2)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子。

所述引物LF为如下(c1)或(c2)：

(c1)序列表的序列3所示的单链DNA分子；

(c2)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的DNA分子。

所述引物LB为如下(d1)或(d2)：

(d1)序列表的序列4所示的单链DNA分子；

(d2)将序列4经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列4具有相同功能的DNA分子。

所述引物F3为如下(e1)或(e2)：