[发明专利]一种水线草中鸡矢藤苷甲酯的提取分离方法在审
申请号: | 201610105418.8 | 申请日: | 2016-02-25 |
公开(公告)号: | CN105713056A | 公开(公告)日: | 2016-06-29 |
发明(设计)人: | 林丽美;廖端芳;夏伯候 | 申请(专利权)人: | 湖南中医药大学 |
主分类号: | C07H17/04 | 分类号: | C07H17/04;C07H1/08 |
代理公司: | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人: | 王文君 |
地址: | 410208 湖南省长沙*** | 国省代码: | 湖南;43 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 水线 鸡矢藤 苷甲酯 提取 分离 方法 | ||
1.一种水线草中鸡矢藤苷甲酯的提取分离方法,其特征在于,包括以下步 骤:
1)将水线草用醇溶剂进行提取,得到水线草醇提物;
2)将所得水线草醇提物分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取;取正 丁醇萃取部位,浓缩得精提浸膏;
3)将所述精提浸膏用甲醇超声溶解,过滤,滤液硅胶拌样后经正相硅胶柱 层析,用洗脱剂进行梯度洗脱,收集洗脱液;所述洗脱剂为氯仿-甲醇洗脱剂, 和/或二氯甲烷-甲醇洗脱剂;
4)将步骤3)所述洗脱液采用柱层析分离法或制备液相分离法进一步纯化, 制得鸡矢藤苷甲酯;
所述柱层析分离法包括将步骤3)所得洗脱液采用葡聚糖凝胶柱层析,以氯 仿-甲醇为洗脱剂;收集洗脱液后经ODS反相柱层析,以甲醇溶液等度洗脱或者 梯度洗脱,收集洗脱液,制得鸡矢藤苷甲酯;
所述制备液相分离法包括将步骤3)所得洗脱液进制备液相,以甲醇水为流 动相进行洗脱,收集洗脱液,制得鸡矢藤苷甲酯;所述制备液相采用LC-3000高 效液相ThermoC18,(250*21.2mm)制备柱柱。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤1)包括将水线草粉 碎至60-80目,加入8-15倍重量的70%甲醇,搅匀,先超声提取0.5-1h,然后回流 提取1-3h,提取温度为60-80℃;过滤;滤渣按上述方法再次进行超声提取、回 流提取;共提取三次,合并滤液,减压浓缩,得到水线草醇提物。
3.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于,步骤2)所述石油醚萃取 为将步骤1)所得水线草醇提物用石油醚萃取3-5次,所述水线草醇提物与石油醚 的重量比例为1-3∶4-6;萃取后保留水部位;
所述乙酸乙酯萃取为将石油醚萃取后所述水部位用乙酸乙酯萃取3-5次,石 油醚萃取后所述水部位与乙酸乙酯的重量比例为1-3∶4-6;萃取后保留水部位;
所述正丁醇萃取为将乙酸乙酯萃取后所述水部位用正丁醇萃取3-5次,乙酸 乙酯萃取后所述水部位与正丁醇的重量比例为1-3∶4-6;萃取后保留正丁醇萃取 部位。
4.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于,步骤3)将所述精提浸膏 用3-5倍重量的甲醇超声溶解,再进行过滤。
5.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于,步骤3)所述梯度洗脱包 括以氯仿-甲醇为洗脱剂,分别以氯仿:甲醇体积比为7:1,5:1,3:1进行第一次梯 度洗脱,收集氯仿:甲醇为7:1的洗脱液;再以氯仿-甲醇为洗脱剂,分别以氯仿: 甲醇体积比为12:1,9:1,7:1,5:1,3:1进行第二次梯度洗脱,收集氯仿:甲醇为 7:1的洗脱液;或者以二氯甲烷-甲醇为洗脱剂,分别以二氯甲烷:甲醇体积比为 12:1,9:1,7:1,5:1,3:1进行第二次梯度洗脱,收集二氯甲烷:甲醇为7:1的洗脱 液,制得鸡矢藤苷甲酯。
6.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于,步骤3)采用100-200目正 相硅胶柱层析。
7.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于,步骤4)所述葡聚糖凝胶 柱层析,以氯仿:甲醇体积比60:40为洗脱剂进行洗脱;所述ODS反相柱层析,以 30%甲醇溶液进行等度洗脱或者以20-50%甲醇溶液进行梯度洗脱。
8.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于,步骤4)所述制备液相分 离法先将步骤3)所得洗脱液经0.22μm微孔滤膜过滤,再取滤液进制备液相。
9.根据权利要求7所述的方法,其特征在于,步骤4)所述制备液相分离法 中所述洗脱剂为25%甲醇水。
10.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)将水线草粉碎至60-80目,加入8-15倍重量的70%甲醇,搅匀,先超声 提取0.5-1h,然后回流提取1-3h,提取温度为60-80℃;过滤;滤渣按上述方法 再次进行超声提取、回流提取;共提取三次,合并滤液,减压浓缩,得到水线 草醇提物;
2)将所得水线草醇提物分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取;取正 丁醇萃取部位,浓缩得精提浸膏;
所述石油醚萃取为将步骤1)所得水线草醇提物用石油醚萃取3-5次,所述水 线草醇提物与石油醚的重量比例为1-3∶4-6;萃取后保留水部位;
所述乙酸乙酯萃取为将石油醚萃取后所述水部位用乙酸乙酯萃取3-5次,石 油醚萃取后所述水部位与乙酸乙酯的重量比例为1-3∶4-6;萃取后保留水部位;
所述正丁醇萃取为将乙酸乙酯萃取后所述水部位用正丁醇萃取3-5次,乙酸 乙酯萃取后所述水部位与正丁醇的重量比例为1-3∶4-6;萃取后保留正丁醇萃取 部位;
3)将所述精提浸膏用3-5倍重量的甲醇超声溶解,过滤,滤液硅胶拌样后经 100-200目正相硅胶柱层析,用洗脱剂进行梯度洗脱,收集洗脱液;
具体地,所述梯度洗脱以氯仿-甲醇为洗脱剂,分别以氯仿:甲醇体积比为7:1, 5:1,3:1进行第一次梯度洗脱,收集氯仿:甲醇为7:1的洗脱液;再以氯仿-甲醇为 洗脱剂,分别以氯仿:甲醇体积比为12:1,9:1,7:1,5:1,3:1进行第二次梯度洗 脱,收集氯仿:甲醇为7:1的洗脱液;或者以二氯甲烷-甲醇为洗脱剂,分别以二氯 甲烷:甲醇体积比为12:1,9:1,7:1,5:1,3:1进行第二次梯度洗脱,收集二氯甲 烷:甲醇为7:1的洗脱液;
4)将步骤3)所述第二次梯度洗脱液采用柱层析分离法或制备液相分离法 进行进一步纯化,制得鸡矢藤苷甲酯;
所述柱层析分离法包括将步骤3)所得第二次梯度洗脱液采用葡聚糖凝胶柱 层析,用氯仿:甲醇体积比为60:40的洗脱剂进行洗脱;收集洗脱液后经ODS反相 柱层析,用30%甲醇溶液等度洗脱或者20-50%甲醇溶液梯度洗脱,收集洗脱液, 制得鸡矢藤苷甲酯;
所述制备液相分离法包括将步骤3)所得第二次梯度洗脱液经0.22μm微孔 滤膜过滤,取滤液进制备液相,以25%甲醇水为洗脱剂等度洗脱,收集洗脱液, 制得鸡矢藤苷甲酯。
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