[发明专利]同步检测肉及肉制品中动物源性成分的试剂盒及其应用在审
| 申请号： | 201610107349.4 | 申请日： | 2016-02-25 |
| 公开（公告）号： | CN105671157A | 公开（公告）日： | 2016-06-15 |
| 发明（设计）人： | 孙桂荣;李明;张伟;李新建;韩雪蕾;乔瑞敏;汪丹;孙彩霞;黄涛;王安思 | 申请（专利权）人： | 河南农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 郑州睿信知识产权代理有限公司 41119 | 代理人： | 牛爱周 |
| 地址： | 450002*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 同步 检测 肉制品 动物 成分 试剂盒 及其 应用 | ||
1.同步检测肉及肉制品中动物源性成分的试剂盒，其特征在于：包含HpaⅡ酶及引物 对H/L；
引物对H/L为：
LCO1490：5’-GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG-3’，
HCO2198：5’-TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA-3’。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：试剂盒还包含TaqMasterMix、 NEBuffer、DNAMarker及去离子水。
3.如权利要求1或2所述试剂盒在同步检测肉及肉制品中动物源性成分方面的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：包括以下步骤：以包含COⅠ基因的待 测样品DNA为模板，利用引物对H/L进行PCR扩增，扩增产物经HpaⅡ酶酶切消化后凝 胶电泳分析，根据特征性酶切条带判定结果；
所述引物对H/L为：
LCO1490：5’-GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG-3’，
HCO2198：5’-TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA-3’。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述PCR扩增的反应体系为：2×Taq MasterMix5μL，10ng/μL模板DNA1μL，10pmol/L引物LCO1490、HCO2198各0.2μL， 去离子水3.6μL，总体积10μL。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述PCR扩增的反应程序为：94℃预 变性5min；94℃变性30s，40℃退火30s，72℃延伸60s，45个循环；72℃延伸10min。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述酶切消化的反应体系为：扩增产 物3μL、10units/μLHpaⅡ酶0.5μL、10×NEBuffer1.5μL，去离子水5μL，总体积10μL。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述酶切消化的反应条件为：37℃下， 酶切15min。
9.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述特征性酶切条带与动物源性成分 的对应关系为：牛，500bp、70bp；羊，500bp、400bp、230bp、120bp、80bp；猪，350bp、 240bp、120bp；鸡，350bp、240bp；乌鸡，450bp、350bp、240bp；鱼，280bp、200bp、 120bp；鼠，380bp、350bp；鸭，350bp、280bp、230bp。
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