[发明专利]一种抗氧化多肽(AOP-OL1)及其制备方法及应用

说明书

技术领域：

本发明属生物医学领域，具体涉及一种抗氧化多肽AOP-OL1及其制备方法 及应用。

背景技术

抗氧化剂是阻止氧气不良影响的物质，它是一类能帮助捕获并中和自由基， 从而祛除自由基对人体损害的一类物质。目前已经发现了大量的抗氧化剂，这 些抗氧化剂可以被分为以下两大类：1)非基因编码的小分子无助，如维生素E、 维生素C、谷胱甘肽等；2)基因编码的大分子物质，如超氧化物歧化酶、过氧 化氢酶、硫氧还蛋白等。这些抗氧化剂已经被广泛应用于各种领域，包括健康、 食品、化妆品及各种工业中，比如作为燃料和润滑剂的稳定剂防止氧化，也可 加在汽油中起到防止聚合从而避免引擎积垢形成的目的，单在2007年，工业用 途的抗氧化剂的就创造了大约37亿美元的收入。基于抗氧化剂的重要性，科学 家们一直在孜孜不倦的寻找着新型抗氧化剂。

两栖动物是水生动物过度到陆生动物之间的重要类群，其皮肤裸露，表面 没有毛发覆盖，直接面对各种生存压力，承担着诸多重要的生物学功能，比如 抵御微生物入侵、体色调节、水盐平衡调节等。已经有大量的研究证据表明， 两栖动物的皮肤能分泌大量的活性物质(主要是蛋白和多肽)使得其能完成这 些重要的生物学功能。最近，在一些两栖动物(云南臭蛙、滇蛙等)的皮肤中 发现了一类新型的抗氧化剂，其化学本质为多肽，和传统的两大类抗氧化剂不 同，其由基因编码，但分子量却很小。和传统的抗氧化剂相比，我们对这一类 新型抗氧化剂的结构和功能了解还知之甚少。

大绿臭蛙(Odorranagraminea)生活在亚洲东南部的茂密森林，在我国主要 广泛分布于强紫外照射的云贵高原，根据其独特的生境，我们推测其皮肤能分 泌高效的抗氧化剂使得其能抵御紫外照射所造成的伤害。

发明内容

本发明的一个目的是从大绿臭蛙中(1)提供1个抗氧化多肽AOP-OL1，(2) 提供其制备方法，(3)提供AOP-OL1的应用。

本发明提供的一种抗氧化多肽AOP-OL1，其特征在于，所述抗氧化多肽具 有下述序列表中的氨基酸序列(SEQIDNO:1)：

LysTyrLeuCysAsnSerAsnPro8；

本发明提供的所述抗氧化多肽AOP-OL1的制备方法，其特征在于，以大绿 臭蛙的皮肤分泌物为原料，可以通过色谱分离技术分离得到。

进一步的，一种抗氧化多肽AOP-OL1的制备方法，包括以下步骤：

(1)样品制备：以大绿臭蛙为原料，用电刺激法取其皮肤分泌物，真空冷冻 干燥后，加入去离子水溶解，制成100mg/ml的初提液；

(2)SephadexG-75柱层析：SephadexG-75柱(GEHealthcare，超细，长 度30cm，内径1.5cm)预先用Tris-HCl缓冲液(pH＝7.8，含0.1MNaCl)平 衡24小时后，取1ml初提液上样；用Tris-HCl缓冲液以流速1.5ml/min进行洗 脱，分别测定洗脱液在280nm下的吸光度，每10min收集一管，收集合并活 性峰值组分的洗脱液，浓缩干燥后得到浸膏a；

(3)高效液相色谱反相层析：将浸膏a中加入去离子水溶解制成1mg/ml 的上样液，备用；预先用含0.1％三氟乙酸的超纯水平衡HypersilODS25mm(4.6 mm×300mm)柱子20min后，用1ml制备液上样；在流速为1ml/min的条件 下，用含0.1％的三氟乙酸的乙腈溶液在线性梯度洗脱(0-100％in100min)监 测波长为215nm，收集合并活性峰值组分的洗脱液，浓缩干燥后得到目标物。

进一步的，抗氧化肽AOP-OL1的制备也可通过本领域常规的方法，采用化 学合成或基因表达的方式得到，它们的氨基酸序列与本发明SEQIDNO:1相同。

进一步的，所述的抗氧化肽AOP-OL1在自由基ABTS⁺清除实验中显示了较 强的抗氧化活性，揭示本发明在抗氧化药物中有潜在的应用前景。

本发明的有益效果在于：

本发明提供的抗氧化肽AOP-OL1具有结构新颖、抗氧化活性强,约为维生素 E的1000倍。将本发明的抗氧化多肽AOP-OL1全序列结构经蛋白质数据库进 行搜寻比较，未发现有任何相同多肽。