[发明专利]miR-21-3p在制备用于检测早期急性肾损伤的试剂中的用途

说明书

技术领域

本发明涉及生物检测领域，特别涉及马兜铃酸类中药致急性肾损伤的早期检测的生物标记物，更具体涉及miR-21-3p在制备用于检测早期急性肾损伤的试剂中的用途。

背景技术

目前，急性肾损伤(AKI)仍然是诊断及治疗的极大难题，当血液及尿液生化指标尿素氮(BUN)、肌酐(CREA)等变化明显时，肾脏的损伤已经很严重，很难恢复了，因此，寻找新的生物标志物来尽早检测AKI已经成为亟待解决的问题。

中药是我国传统医学的宝贵财富，一直以来都以其较好的临床疗效和较少的副作用而受到人们的亲睐，在世界范围内也得到了广泛的应用。但无法避免的是，中药存在一定的毒性，马兜铃酸的肾毒性就是其中之一，但是当常规的肾毒性检测指标(如Scr、BUN等指标)出现异常时，肾脏已经受到了较严重的损伤，因此筛选中药早期肾毒性生物指标监测肾毒性已成为亟待解决的问题。

发明内容

为克服现有技术中的上述问题，本发明提供了一种miR-21-3p在制备用于检测早期急性肾损伤的试剂中的用途，提供了一种马兜铃酸类中药早期急性肾损伤的生物标志物，为临床医学和生物医药发展提供了一种新方案。

本发明采用了以下的技术方案：

miR-21-3p在制备用于检测早期急性肾损伤的试剂中的用途，其中急性肾损伤由含马兜铃酸的中药所致。

优选地，马兜铃酸为马兜铃酸A。

进一步地，早期急性肾损伤后，miR-21-3p在肾脏、血浆中表达上调。

进一步地，含马兜铃酸的中药引起急性肾损伤的给药途径为腹腔注射或口服。

进一步地，检测包括以下步骤：

(1)检测血浆中miR-21-3p的表达；

(2)基于步骤(1)中的检测结果判断急性肾损伤的发病可能性。

优选地，在步骤(1)中，采用染料法实时荧光定量PCR检测血浆中miR-21-3p的表达。

其中，miR-21-3p的核苷酸序列为：GACAGCCCATCGACT。

与现有技术相比，本发明具有以下优点：

本发明提供了一种miR-21-3p在制备用于检测早期急性肾损伤的试剂中的用途，即，提供了一种可检测早期急性肾损伤的生物标志物miR-21-3p。本发明可方便、准确地检测出早期急性肾损伤，为临床医学提供了一种新方案，具有良好而广泛的应用前景。在本发明中，选用研究公认的具有肾毒性的含马兜铃酸的中药，更具体地，马兜铃酸A，从microRNA的角度筛选出肾毒性早期生物标志物，建立了中药肾毒性的可靠的早期生物学监测指标，同时可预期地应用到其他类型急性肾损伤中，大大方便了急性肾损伤的早期诊断，可尽早地对患者进行确诊并调整治疗方案，因而本发明在急性肾损伤的检测和临床医学方面迈出了划时代的一步，具有广泛而良好的应用前景。

附图说明

图1为实施例1的大鼠给药后随时间的体重变化图。

图2为实施例1的大鼠的肾脏病理组织学图片。

图3为实施例1的染料法实时定量PCR检测的大鼠肾脏中miR-21-3P的表达图。

图4为实施例1中大鼠血浆中miR-21-3P的表达图。

图5为实施例1中40mg/kg剂量组大鼠给药第二天后miR-21-3P在不同组织中的表达图。

图6为实施例2的大鼠的血浆中miR-21-3P的表达图。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步详细说明。

实施例1

马兜铃酸A经腹腔注射给予雄性Wistar大鼠6天，建立马兜铃酸A致急性肾损伤的模型。

实验过程：对4-5周龄，体重约80-100g的雄性Wistar大鼠给药，首次给药前至少适应3天，根据适应期动物的健康状况和体重选自适宜的大鼠，按照体重均衡性原则随机分成4组。每天给药1次，连续给药6天，其中给药的溶媒为PEG400溶液与去离子水的体积比为1：1的混合溶剂。给药期结束后，大鼠经由腹主动脉采集血液及组织样本。采集时间：D2、D4、D6。动物分组为对照组、10mg/kg剂量组、20mg/kg剂量组、40mg/kg剂量组。

实验组动物在给药期D2、D4、D6经戊巴比妥钠麻醉后解剖，每次每组解剖5只大鼠，制备40mg/kg剂量动物肾脏的miRNA的芯片，检测出肾脏特异性表达上调的miRNA，即miR-21-3P，通过染料法实时荧光定量PCR验证实验证明上调确实存在。