[发明专利]一种缺血性脑卒中筛查试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了miRNA‑98在制备缺血性脑卒筛查试剂盒中的应用，本发明揭示miRNA‑98通过靶向负性调节PAFR的表达，进而影响PAFR及其下游炎症相关的信号转导过程而在脑卒中发生中发挥作用。本发明为miRNA‑98在缺血性脑卒中诊断中的应用提供了新的作用机制。

技术领域

本发明属于基因检测技术领域，具体涉及一种缺血性脑卒中筛查试剂盒及其应用。

背景技术

RNA是生物体内最重要的物质基础之一，它与DNA和蛋白质一起构成生命的框架。但长久以来，RNA一度被认为仅仅是DNA和蛋白质之间的“过渡”，它从DNA那儿获得自己的顺序，然后将遗传信息转化成蛋白质。然而，一系列的研究表明，这些小分子RNA事实上操纵着许多细胞功能，它可通过互补序列的结合反作用于DNA，从而关闭或调节基因的表达。最近发现的一类非蛋白编码的RNA家族，microRNA(miRNA，即微小RNA)，可以通过与特定mRNA结合或调节特定mRNA的蛋白质翻译过程来调控基因表达。目前人类基因组中已确认的miRNA有一千多种，可能参与调控人类30％蛋白编码基因的表达。

MicroRNA简称为miRNA，通常长度为19～25个核苷酸，广泛存在于各种动植物甚至单细胞真核生物中，是一类在进化上高度保守的小分子单链RNA。miRNA位于基因内含子区域，在细胞核内编码miRNA的基因转录成pri-microRNA(pri-miRNA)。Pri-miRNA在一种Drosha RNase的作用下，剪切为约70个核苷酸长度，具有茎环结构的miRNA前体(pre-miRNA)。pre-miRNA在Ran-GTP依赖的核质/细胞质转运蛋白Exportin 5的作用下，从核内运输到胞质中。在Dicer酶的作用下，pre-miRNA被剪切成21～25个核苷酸长度的双链miRNA:miRNA。随后双链miRNA:miRNA解旋，成熟的miRNA进入到胞浆RISC(RNA诱导的沉默复合物)中发挥基因沉默功能。miRNA与下游特定基因的信使RNA(mRNA)的3’端非编码区(3’UTR)产生碱基互补配对，引起该mRNA的降解或抑制其翻译，导致蛋白表达失败。我们将这些下游的基因称作miRNA的靶基因，他们在细胞中通常具有重要的生物学功能，miRNA通过调节靶基因的表达在细胞中行使重要的功能，与胚胎的发育，生长发育、细胞的增殖、分化密切相关。科学家已证实，miRNA的核苷酸序列在不同物种间高度保守，突变率极低，其表达有基因簇集现象，时空及组织特异性。miRNA在转录后水平调控蛋白质基因的表达谱来决定细胞分化、胚胎发育等一系列重要生命活动的进程及多样性。据发现，miRNA不仅是细胞增殖、分化和凋亡的重要调控因子，50％以上的miRNA定位在肿瘤相关基因组区域，包括LOH区、染色体扩增区及脆性位点等。经鉴定，miRNA在多种血液系统肿瘤和实体瘤中的表达谱发生改变，这为我们从RNA调控的角度揭示疾病发生机制提供理论基础，并为疾病诊断和治疗提供新的基因靶点和分子标记。

在人类基因组序列中，miR-98为一种MicroRNA，位于Xp11.22。miR-98的序列为5’-UGAGGUAGUAAGUUGUAUUGUU-3’(GeneBank：GeneID:407054)。miR-98在进化上高度保守，不同物种间存在同源性。

根据世界卫生组织(WHO)公布的资料显示，脑卒中是全球威胁人类健康的重大疾病之一，是目前首要的致残和仅次于癌症和心血管疾病的第三大致死性疾病。流行病学显示，脑卒中发病呈年轻化和逐年递增的趋势。脑卒中根据病因的不同主要分为缺血性和出血性脑卒中，其中缺血性脑卒中占87％。研究揭示影响脑卒中发生、发展的主要病理机制包括能量代谢障碍、神经元的过度去极化、兴奋性毒性损伤、离子稳态失衡、炎症与免疫障碍、凋亡及自噬等。控制脑卒中病死率并提高生存质量是当前医学研究亟待解决的难题。目前美国FDA批准用于治疗脑卒中的仅组织型纤维蛋白酶原激活剂(tPA)，由于其严格的治疗时间窗及易诱发脑出血等并发症极大地限制了其临床的广泛应用，脑卒中的药物研发仍任重道远。随着基因工程研究的深入，科学家对运用基因工程研制药物表现出浓厚的兴趣。

发明内容