[发明专利]特异性结合前列腺癌的短肽PCP14及其应用

说明书

技术领域

本发明属于蛋白质多肽技术领域，具体涉及一系列可特异性结合前列腺癌的 短肽。

背景技术

前列腺癌是严重威胁中老年男性健康的恶性肿瘤之一，而且发病率逐年上 升，死亡率高，仅次于肺癌，位居第二。50多年以来，雄激素阻断治疗一直是 前列腺癌的标准疗法，然而，大多数患者最终会发展为激素抵抗性前列腺癌 (hormonerefractoryprostatecancer,HRPC)。对于HRPC，目前尚无有效的疗法， 而现有治疗手段包括放射治疗、化学治疗等均不能延长患者生命达一年以上。因 此探索新型有效的前列腺癌治疗方法，一直是泌尿外科临床所面临的重要课题之 一。

目前我国对于前列腺癌的筛查率相对较低，这也是造成前列腺癌死亡率偏高 的重要原因之一。因此，本领域迫切需要开发可用于前列腺癌诊断的相关蛋白。 而多肽因分子量小，组织穿透性好，无免疫原性且对细胞表面受体具有较高亲和 力而成为靶向传递研究中的理想配体。然而已知的天然受体-配体对是非常有限 的。

噬菌体展示肽库技术的发展则为发现和表征新的配体及对应受体提供了有 力的工具，不仅有望实现临床应用于肿瘤的靶向治疗，也有助于解释疾病发生机 制的理论研究。噬菌体展示技术通过将特定片段插入噬菌体DNA中而将相应的 多肽表达在pIII衣壳蛋白上，从而在噬菌体的DNA和衣壳蛋白之间搭建桥梁， 使得各种靶分子的多肽配体可通过体外或体内筛选得以快速鉴定。发展至今，应 用此技术已成功筛选得到针对肝癌、结肠癌、乳腺癌等多种人类肿瘤的靶向多肽， 但是对于筛选前列腺癌靶向配体的相关报道则很少。

因此，本发明利用噬菌体展示肽库技术于前列腺癌肿瘤模型体内筛选得到 16条可靶向前列腺癌的短肽，并对此多肽的靶向特性进行了鉴定，以考察其作 为靶向配体用于传递药物至前列腺肿瘤部位的可行性。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一系列利用噬菌体展示肽库技术 筛选得到的具有靶向前列腺癌特性的多肽。

本发明的另一个目的是提供上述多肽在制备前列腺癌诊断试剂盒中的应用。

本发明的目的通过下述技术方案予以实现：

用噬菌体展示肽库减性筛选肿瘤细胞特异性结合多肽或靶肽的方法为：通常 用两个细胞系进行筛选，将噬菌体展示随机肽库先通过不含靶抗原的正常细胞筛 选，未结合的上清再通过含靶抗原的细胞，筛选出噬菌体扩增后进行下一轮筛选， 最终得到特异性结合肽。

首先，采用上述噬菌体展示肽库减性筛选技术，以前列腺癌LNCaP和PC3 细胞作为靶细胞，正常细胞为吸附细胞，对NEWENGLANDBiolabs的 Ph.D.-7^TMPhageDisplayPeptideLibraryKit进行四轮体外筛选，通过逐轮增强洗 涤力度，获得了前列腺癌特异性的噬菌体克隆。上述的筛选后，分别于第二轮、 第三轮和第四轮筛选结果中随机挑取单克隆进行DNA的提取和测序。应用生物 信息学工具分析筛选得到的多肽序列，同时酶联免疫吸附实验用于分析候选噬菌 体单克隆对细胞的结合能力，从而鉴定出与前列腺癌细胞具有较强的亲和力的噬 菌体16个克隆，将该16个克隆送去测序，并分别命名为PCP1-16，测序结果证 实PCP1-16的氨基酸序列分别如SEQIDNO：1-16所示。

本发明筛选得到的多肽经鉴定具有以下特性及优点：

多肽可有效地识别并特异性结合前列腺癌细胞系LNCaP和PC3，而对正常 的前列腺细胞系RWPE-1，及其他肿瘤细胞HepG2、A549、SW480的结合能力 弱，表现出针对前列腺癌特异的识别和结合能力；

该多肽具有分子量小，组织穿透性好，无免疫原性且对细胞表面受体具有较 高亲和力的普遍特点，该多肽可用于制备前列腺癌诊断试剂药盒，该试剂盒诊断 灵敏度高、特异性高，可用于前列腺癌高危人群的普查及前列腺癌的早期临床诊 断、以及治疗效果的评价与病人病情转归、预后的判断。

附图说明

图1为ELISA检测第四轮筛选噬菌体克隆与LNCaP和PC3的亲和力对比柱 状图；