[发明专利]抗乙型肝炎病毒的免疫反应性细胞

说明书

技术领域

本发明涉及一种特异性地识别感染了乙型肝炎病毒的细胞的嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor，CAR)，表达其的免疫反应性细胞及利用其来调节或治疗源自乙型肝炎病毒的肝疾病的方法。

背景技术

乙型肝炎是全世界范围内主要的问题性疾病。据世界卫生组织(WHO，World Health Organization)的统计结果表明，约有20亿人感染有乙型肝炎，其中，推定约有2亿4千万人患有慢性肝炎。肝细胞癌在世界范围的癌症死亡原因中排第三位，每年有600,000名以上的患者因源自乙型肝炎病毒的慢性肝疾病(肝硬化或肝癌)而死亡。

基础的慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染会诱发肝硬化或肝细胞癌(HCC，hepatocellular carcinoma)。与其它癌症相比，肝细胞癌的预后差，其原因在于，肝癌细胞在早期通过血管大范围地扩散，并具有可加快生长速度的肿瘤生物学特性。另外，由于大部分肝细胞癌会伴有慢性肝炎或肝硬化，因此成为积极治疗癌症方面的阻碍。

在乙型肝炎患者居多的亚洲或非洲，肝癌患者中有约70～80％的乙型肝炎病毒携带者。据台湾的一个报道，乙型肝炎病毒携带者发生肝细胞癌的风险度与非携带者相比，约高出200倍。尤其是在病毒增殖速度快的情况下，即血清HBVe抗原或HBV-DNA为阳性时，他们中年龄较高或患有肝硬化的人更易患上肝癌。

用于治疗源自HBV的慢性肝疾病的药物有干扰素-α(interferon-α；IFN-α)、聚乙二醇干扰素(PEG-IFN)、核苷类似物(拉米夫定、恩替卡韦及替比夫定)及核苷酸类似物(阿德福韦及替诺福韦)等。优选的药物为，能够完全去除乙型肝炎病毒，并能够实现从乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)阳性到抗表面抗原阳性的血清转化(seroconversion)的 药物，然而，上述药物没有显示出这种效果。

IFN-α为长期使用的抗HBV药物，但已知其具有严重的副作用，并且在治疗效果方面有限。对乙型肝炎病毒表面抗原的去除率约在8％以下。核苷类似物及核苷酸类似物等药物虽然能够抑制病毒的逆转录酶(viralreverse transcriptase)，但不能去除乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA(HBV cccDNA)。这些药物虽然能抑制HBV的复制，但由于HBV cccDNA一直存在于宿主细胞的核中，且HBV DNA会插入到宿主细胞的染色体内，因此无法实现患者对HBV免疫环境的调节或去除病毒。而且，在患者中断治疗的情况下，HBV的复制会退回到治疗前的状态，从而使肝炎症状大大恶化。虽然需要使用这种药物持续进行治疗，但是难以期待大的效果，而且患者可能需要面对这种持续治疗所带来的变异病毒所导致的耐药性等严重的副作用。

由于肝细胞癌在早期没有症状，因此，大部分患者为在进展到一定程度后才被发现，在这种情况下，目前还没有有效的治疗方法，对于早期诊断的肝细胞癌，首选的治疗方法为肝移植或肝切除术，但在患者中能够进行肝切除术的比例仅为30-40％。作为其它治疗方法，虽然可以使用肝移植、全身性化疗、放射治疗、射频消蚀治疗方法等，但是复发率高，且在移植后排斥反应等副作用较严重。目前为止，作为酪氨酸激酶抑制剂的索拉非尼是能够治疗已进行的肝细胞癌的唯一药物，但是生存延长期仅为3个月左右。更主要的问题是在实施了现有的治疗术之后会引起肝细胞癌的复发或向肝细胞以外的器官转移。上述问题是由插入有未完全被去除的HBV的肝细胞所导致的。因此，需要开发出一种用于治疗源自HBV的肝细胞癌的新型治疗方法。

免疫治疗方法可以增强存在于体内的现有的免疫反应，或对新型病毒或癌细胞诱导特异性免疫反应，从而能够有效且选择性地对病毒感染细胞或肝细胞癌进行标记。即，可以通过非特异性宿主的免疫反应或HBV特异性辅助性T细胞(T-helper)或细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T limphocytes，CTL)的活性化来去除病毒或肝细胞癌。

目前最受瞩目的治疗途径为，将经过基因操作(genetically modified)的HBV特异性T细胞进行过继转移(adoptive transfer)的方法。T细胞的过继转移是通过对新型病毒或癌细胞诱导特异性免疫反应，从而可以恢复丧失的抗HBV的免疫功能。