[发明专利]一种改善体外受精雌性胚胎附植后发育质量的方法

说明书

本发明提供了一种改善体外受精(IVF)雌性胚胎附植后发育质量及校正IVF胚胎性别比例的方法。本发明将通过IVF技术获得的小鼠受精卵移入添加有低剂量的视黄酸(RA)的培养液中进行短期培养，以此改善IVF胚胎早期发育中的雌性特异的表观修饰事件(即X染色体失活)的正常建立，从而减少小鼠IVF雌性胚胎附植后的异常发育比例，最终校正小鼠IVF出生性别比例失衡问题。此外，本发明成功在牛IVF体系中应用，有效提高了牛IVF雌性囊胚的发育率，校正了牛IVF囊胚的性别比例。本发明中RA作为输卵管广泛表达的内源活性物质，在IVF体系中适量添加该物质而不是盲目的添加外源成分，极大程度地确保了应用方面的安全性。

技术领域

本发明涉及有性繁殖技术领域，具体地说，涉及一种改善体外受精雌性胚胎附植后发育质量的方法。

背景技术

体外受精(in vitro fertilization,IVF；即试管婴儿)广泛应用于治疗人类不育。目前，全球已有超过540万例的试管婴儿出生，并且呈35万例/年的速度激增。此外，IVF也广泛应用于家畜的良种扩繁，例如牛胚胎移植中IVF胚胎所占比例已达40％。尽管IVF存在如此广阔的应用空间，但是IVF仍存在许多制约因素，例如：发育率低，妊娠丢失，早产，出生缺陷，性别比例失衡，患糖尿病、高血压风险增高等。目前，针对这些IVF缺陷，主要通过改变体外胚胎操作的物理环境，受精液、培养液成分，添加小分子物质等，该研究进展缓慢。

近年来，IVF引发的性别失衡问题得到广泛关注。自1991年，Avery B等首次报道牛IVF囊胚存在性别比例失衡问题(雄性多，雌性少)，之后牛、猪IVF研究多次证实这一问题。最近，大洋洲、英国分别展开的数十万例人流行病学调查显示人IVF也同样存在出生性别比例失衡问题(男多女少)。目前，针对这一问题，一种改善方式是向培养液中添加小分子物质。例如，在猪IVF胚胎的培养液中替换和添加不同的物质，发现玻尿酸(hyaluronic acid,HA)可显著提高囊胚率，但会使性别比例失衡问题更严重(Torner E,Bussalleu E,BrizMD,Yeste M,Bonet S Embryo development and sex ratio of in vitro-producedporcine embryos are affected by the energy substrate and hyaluronic acidadded to the culture medium.Reprod Fertil Dev 2014；26:570-577.)。在牛IVF胚胎培养液中添加6-磷酸葡糖脱氢酶抑制因子DHEA和6-AN，可显著改善牛IVF囊胚的性别比例，但是这一添加处理会降低牛IVF胚胎的发育效率(Kimura K,Spate LD,Green MP,Roberts RMEffects of D-glucose concentration,D-fructose,and inhibitors of enzymes ofthe pentose phosphate pathway on the development and sex ratio of bovineblastocysts.Mol Reprod Dev 2005；72:201-207.)。目前，针对IVF技术所致性别失衡问题的所有解决方案都没达到预期效果。

发明内容

本发明的目的是提供一种改善体外受精雌性胚胎附植后发育质量的方法。